截短型人胰岛素样生长因子－Ⅰ双基因拷贝工程菌株及其构建方法

摘要：

本发明涉及一种截短型人胰岛素生长因子－I双基因拷贝工程菌株及其构建方法，用三条寡核苷酸引物，两次PCR扩增技术，扩增两个截短型人胰岛素样生长因子－I（tIGF－I）基因，按串联方法使两个rIGF－I基因首尾相接插入到质粒截体pExSecl中，构建出表达载体pExSecl/2（tIGF－I），即含双拷贝tIGF－I双基因拷贝的基因工程菌株E．coli BL21（DC3）／pExSec1/2（tIGF－I），表达产量比单拷贝基因质粒明显增加，达菌体蛋白的19－22％。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN00123610.5

申请日期：2000-08-30

公开/公告号：CN1281893

公开/公告日：2001-01-31

主分类号：C12N1/21

申请/专利权人:北京东方龙基生物技术有限公司

发明/设计人:刘晓辉;俞汝龙

主申请人地址:北京市海淀区学院路38号卫生部医院管理研究所俞汝龙转

专利代理机构:三高专利事务所

代理人:吴凤英

国别省市代码:北京;11

权利要求：

权利要求书1、一种截短型人胰岛素样生长因子—Ⅰ双基因拷贝工程菌株，其特征在于，选用德国明斯特大学构建的融合体表达载体pExSecⅠ，该载体含M3复制原点，T7启动调节序列，卡那霉素抗性基因，多克隆位点，和蛋白A的信号序列S和ZZ序列位点，在用限制性内切酶切除了SZZ序列后，在此位置接入两个首尾串联的双拷贝截短型人胰岛素样生长因子—Ⅰ基因，得到非融合表达载体pExSecⅠ转化大肠杆菌中，PExSecⅠ其结构如下：