烟草细胞培养法生产烟碱
本发明涉及一种烟草细胞培养法生产烟碱，属于生物工程领域。本发明以烟草种子为原始材料，获得烟草无菌实生苗外植物，对外植体进行诱导培养，建立并筛选出了适合通过二步细胞培养法生产烟碱的细胞悬浮体系及其相应的生长、生产培养基配方。该方法有培养周期短、产率高、对环境无污染等特点。
发明专利
CN00121553.1
2000-08-11
CN1283691
2001-02-14
C12N5/04
西北农业大学无公害农药研究服务中心
张兴;曹阳;董建新
712100陕西省杨陵西北农林科技大学西农校区76信箱
农业部专利事务所
林祥明
陕西;61
权利要求书1、一种烟草细胞系，其特征在于：(1)以烟草种子为材料，用75％的医用乙醇浸泡30秒，随后转移至0．1％氯化汞水溶液中进行表面消毒，播种于高温灭菌过的MS基本培养基上，在温度为25±1℃下光照培养，两周后得烟草无菌苗；(2)以所获无菌苗的根、茎、叶等器官为外植体，用下述的生长培养基固体培养，培养温度25±1℃，经6周培养，即可在外植体的切口部位形成烟草愈伤组织；(3)对所得到的愈伤组织用下述的生长培养基进行液体悬浮震荡培养，培养温度25±1℃，无光照，每25天继代一次，继代培养10-30次，获得烟草细胞系；其中生长培养基组成成分：┏━━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━┓┃ ┃生长培养其(mg／l) ┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ NH4NO3 ┃ 825 ┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ KNO3 ┃ 950 ┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ CaCl2 ┃ 166 ┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ MgSO47H2O ┃ 1233 ┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ KH2PO4 ┃ 680 ┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ KI ┃ 0．83 ┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ H3BO3 ┃ 6．2 ┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ MnSO4·7H2O ┃ 22．3 ┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ ZnSO4·2H2O ┃ 4．6 ┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ Na2MoO4·2H2O ┃ 0．25 ┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ CuSO4·5H2O ┃ 0．025 ┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ CoCl2·6H2O ┃ - ┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ CoSO4·7H2O ┃ 0．03 ┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ FeSO4·7H2O ┃ 27．8 ┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ Na2·E0TA·2H2O ┃ 37．3 ┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ 肌醇 ┃ 100 ┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ 烟酸 ┃ - ┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ 盐酸吡哆醇 ┃ - ┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ 盐酸硫胺素 ┃ 1 ┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ 甘氨酸 ┃ - ┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ 蔗糖 ┃ 2％ ┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ NAA ┃ 1．0 ┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ 6-BA ┃ 0．5 ┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ KT ┃ - ┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━┫┃ 水解酪蛋白 ┃ - ┃┗━━━━━━━━━━┻━━━━━━━━━┛