重组噬菌体在膜生物反应器的连续生产方法
本发明是一种重组噬菌体在膜生物反应器的连续生产方法，利用ＤＮＡ重组技术，将外来的目标蛋白融合在丝状噬菌体的截断的基因３蛋白上，在膜生物反应器系统里实行高密度培养大肠杆菌宿主，连续生产重组噬菌体，并在重组噬菌体上的外来蛋白和基因３蛋白之间预先设计一个蛋白酶酶切识别位点，利用蛋白酶水解重组噬菌体，水解后的蛋白质溶液通过亲和色谱分离纯化外来蛋白质，实现了连续生产外来稀有蛋白质，并使该蛋白质保持原来的高度生物活性。
发明专利
CN00119487.9
2000-07-20
CN1280188
2001-01-17
C12N7/01
上海交通大学
张雪洪;唐涌濂
200030上海市华山路1954号
上海交通大学专利事务所
毛翠莹
上海;31
权利要求书1、一种重组噬菌体在膜生物反应器的连续生产方法，其特征在于(1)、利用DNA重组技术，将外来的目标蛋白融合在丝状噬菌体的基因3蛋白上，该基因3蛋白为截断的基因3蛋白，去除了其N—末端的部分氨基酸；(2)、在重组噬菌体的外来蛋白和基因3蛋白之间的融合位置中设计有一蛋白酶酶切位点，将重组的表达噬菌粒转化大肠杆菌宿主细胞；(3)、在膜生物反应器中，将包含重组噬菌粒的大肠杆菌细胞进行间歇搅拌发酵，并通入无菌空气，培养液的pH值控制在5～7之间，生产过程中发酵温度为28～42℃；(4)、1～2个小时后添加辅助噬菌体；(5)、间歇发酵5～8个小时后开始进行料液循环，转为连续培养，选择微过滤膜孔径为0．2～0．3μm，每小时循环量为反应器料液的1．5～3．0倍，连续生产的稀释率为0．1～0．2，循环后同时进料，同时出料，保持稳态生产过程；(6)、在产品中加入蛋白酶，进行蛋白酶解反应，然后通过亲和色谱分离和纯化目标蛋白质。