多种病毒同步检测的方法

摘要：

本发明公开了一种同步检测六种病毒（HIV1，HCV，HBV，HCMV，HSV1和EBV）多重PCR的方法，其特点是通过合理设计引物和采用均一设计法（U₁₀^*（10⁸）及其实验，优化引物浓度组合及PCR条件，在同一个反应管中和同一个热循环条件下，对六种病毒中的1—6种进行扩增，并通过凝胶电泳分离和检测。该发明除具有经典PCR的灵敏度、快速、简便等特点以外，主要是实现了血液中六种病毒的同步检测，成本更低，能用于开发相关试剂盒，用于血源质量控制、临床诊断和病毒流行病控制。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN00115958.5

申请日期：2000-08-16

公开/公告号：CN1292424

公开/公告日：2001-04-25

主分类号：C12Q1/70

申请/专利权人:中国科学院武汉病毒研究所

发明/设计人:张先恩;陶生策;刘虹;李天宪;张治平;胡勤学;梁布锋

主申请人地址:430071湖北省武汉市武昌小洪山

专利代理机构:中国科学院武汉专利事务所

代理人:王敏锋

国别省市代码:湖北;42

权利要求：

权利要求书1．一种多种病毒同步检测的方法，该方法包括以下步骤：A．设计用于同步扩增六种病毒HIV1、HCV、HBV、HCMV、HSV和EBV的引物，各引物针对相应病毒高度保守基因，引物的退火温度为56℃-64℃，引物两两之间无三碱基以上之互补，PCR产物两两长度之差大于30-50bp；B．多重PCR引物浓度的均匀设计，将扩增病毒每个靶基因的一对引物定义为一个因素，设因素的水平范围为0．1μmol／L-0．6μmol／L，共10个水平，均匀设计表为U10+(108)，通过凝胶电泳分离检测多重PCR结果；C．六种病毒HIV1，HCV，HBV，HCMV，HSV1和EBV基因同步检测的PCR，反应体积30μl，Taq酶1．5U，缓冲液：1×，Mg++∶2．5mmol／L，dNTPs300μmol／L，引物微摩尔浓度组合为；反应在PE480热循环仪上进行，热循环条件：94℃、3分钟，1个循环；94℃、1分钟，50℃、1分钟，72℃、2分钟，30个循环；94℃、1分钟，50℃、1分钟，72℃、7分钟，1个循环。