固定化氨基酰化水解酶拆分外消旋氨基酸生产左旋氨基酸的方法

摘要：

一种固定化氨基酰化水解酶拆分外消旋氨基酸生产左旋氨基酸的方法。该方法先将自由状态的氨基酰化水解酶经弱酸性阴离子交换树脂固定后，制成固定化酶柱，另将外消旋氨基酸用醋酐N－乙酰化后制成D，L－N－乙酰基氨基酸，并配制成5～15％(w／w)水溶液，在42～45℃，以0．01～0．05mL／min·g载体的流速匀速通过固定化酶柱，进行酶法拆分。拆分液经真空浓缩，冷却结晶，分离得左旋氨基酸和D－N－乙酰基氨基酸。D－N－乙酰基氨基酸经冰乙酸外消旋后，制成D，L－N－乙酰基氨基酸，按拆分参数通过固定化酶柱，进行拆分。如此循环，制得左旋氨基酸。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN00113235.0

申请日期：2000-01-18

公开/公告号：CN1306092

公开/公告日：2001-08-01

主分类号：C12P13/04

申请/专利权人:覃业亚

发明/设计人:覃业亚

主申请人地址:415300湖南省石门县楚江镇澧阳东路103号

专利代理机构:湖南省常德市专利事务所

代理人:唐治芳

国别省市代码:湖南;43

权利要求：

1、一种固定化氨基酰化水解酶拆分外消旋氨基酸的方法，其特征是：(1)弱酸性阴离子交换树脂经平衡后，装柱，将氨基酰化水解酶(市售品)制成1000～1500μ/ml水溶酶在42～45℃以0.01～0.05mL/min·g载体的流速匀速通过载体柱，进行酶的固定化，当固定化酶活力达到500～700μ/g载体时，固酶完毕。(2)将D,L-N-乙酰基氨基酸配成5～10％(w/w)水溶液，用<chemistry-cwu><chem><cml><molecule>Na<sb>2</sb>CO<sb>3</sb></molecule></cml></chem></chemistry-cwu>或<chemistry-cwu><chem><cml><molecule>NH<sb>3</sb>·H<sb>2</sb>O</molecule></cml></chem></chemistry-cwu>调整溶液PH为6.5～10.0。(3)将D,L-N-乙酰基氨基酸水溶液在42～45℃保温状态下，以0.01～0.05ml/min·g载体的流速匀速通过酶柱，进行拆分。(4)拆分液在60～70℃真空减压浓缩至原体积的1/2～1/4冷却至0～5℃，搅拌结晶，分离后经乙醇或甲醇洗涤，干燥得左旋氨基酸。(5)调整结晶母液PH1.0～5.0，搅拌，结晶，分离，干燥，得D-N-乙酰基氨基酸。(6)将D-N-乙酰基氨基酸制得D,L-N-乙酰基氨基酸。