褪黑素通过下调SLC7A11表达来诱导胶质瘤细胞SH-SYSY铁死亡的机制研究

摘要：

目的 探讨褪黑素(Melatonin,MT)通过下调溶质载体家族7成员11(Solute carrier family 7member 11,SLC7A11)表达对胶质瘤细胞(Glioma cell,SH-SYSY)铁死亡的影响.方法 使用不同水平的MT处理人胶质瘤SH-SY5Y细胞,采用细胞计数试剂盒-8(Cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞活性,进而选择合适的MT水平;实验分组为二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO)组(加入常规培养基)、MT组(加入1 mmol/L的MT)、凋亡抑制剂氟甲基酮(Z-VAD-FMK)+MT组(加入1 mmol/L的MT和20μmol/L的凋亡抑制剂Z-VAD-FMK)、坏死性凋亡抑制剂Necrosulfonamide(Nec-1)+MT组(加入1 mmol/L的MT和1μmol/L的坏死性凋亡抑制剂Nec-1)、自噬抑制剂Chloroquine+M T组(加入1 mmol/L的M T和5 mmol/L的自噬抑制剂Chloroquine)、特异性铁死亡抑制剂Deferoxamine(DFO)对照组(加入20μmol/L的特异性铁死亡抑制剂DFO)及DFO+M T组(加入1 mmol/L的M T和20μmol/L DFO);CCK-8法检测细胞活性;碘化丙啶(Propidium iodide,PI)染色法评价细胞死亡情况;Phen Green SK荧光指示剂法测定细胞Fe2+水平;活性氧(Reactive oxygen,ROS)检测试剂盒测定细胞总ROS水平;C11-BODIPY染色法检测细胞脂质活性氧(Lip-id reactive oxygen species,lipid ROS)水平;总谷胱甘肽(Glutathione,GSH)检测试剂盒测定细胞GSH水平;Western blot法检测细胞铁蛋白重链(Ferritin heavy polypeptide,FT H)、铁蛋白轻链(Ferritin light chain,FTL)、膜铁转运蛋白(Ferroportin,FPN)、转铁蛋白受体1(Transferrin receptor 1,TFR1)和SLC7A11蛋白表达水平;实时定量反转录聚合酶链反应(Real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测细胞SLC7A11 mRNA表达水平.结果 随着MT水平的增高,SH-SY5Y细胞活性逐渐降低(P<0.05),由于1 mmol/L处理的SH-SY5Y细胞活性最低,因此选择1 mmol/L MT诱导细胞.与DMSO组比较,DFO+MT组SH-SY5Y细胞活性显著升高(P<0.05),而Z-VAD-FMK+MT组、Nec-1+MT组和Chloroquine+MT组SH-SY5Y细胞活性无明显差异(P>0.05).此外,MT能显著提高SH-SY5Y细胞中Fe2+水平、ROS和lipid ROS水平以及TFR1蛋白表达水平,降低GSH水平和FPN1,FTH,FTL蛋白及SLC7A11基因表达水平,促进细胞铁死亡(P<0.05),而DFO则能逆转M T对上述指标水平的影响(P<0.05),但DFO本身对上述指标水平无明显影响(P>0.05).结论 MT可能通过下调SLC7A11表达来提高细胞内F e2+水平,进而诱导胶质瘤细胞铁死亡.

关键词：褪黑素、溶质载体家族7成员11、胶质瘤、铁死亡

所属期刊栏目：29

分类号：R739.41(肿瘤学)

资助基金：邯郸市科学技术资助项目1723208069-1

在线出版日期：2022-11-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：416-421