猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白胞外区的串联表达及免疫原性分析

摘要：

为建立基于GP5蛋白的PRRSV中和抗体检测方法,本实验通过基因合成技术将GP5蛋白的胞外区(GP5-ecto)进行串联合成,并将该串联基因克隆到pET28a载体上,在37℃培养含重组质粒pET28a-GP5-ecto的E.coli BL21(DE3)细胞至OD600值为0.6～1.0时,以终浓度为0.5 mM的IPTG诱导4 h后,重组GP5-ecto蛋白实现了高效表达.Western blot证实GP5-ecto蛋白能与PRRSV阳性猪血清发生特异性反应.Ni-NTA亲和层析纯化后,间接ELISA证实1:400倍稀释的PRRSV阳性猪血清可检测到低至0.125μg/ml的GP5-ecto蛋白,表明GP5-ecto蛋白具有良好免疫原性.IFA试验证实GP5-ecto蛋白免疫BALB/c小鼠后获得的鼠血清能与天然PRRSV发生反应,说明重组蛋白与病毒天然蛋白的结构具有较高的相似性.本研究获得的GP5-ecto纯化蛋白,为PRRSV中和抗体ELISA检测方法的建立提供了材料.

关键词：PRRSV-GP5胞外区、串联表达、免疫原性分析

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分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：河南省科技攻关计划项目202102110100,212102310335

在线出版日期：2021-04-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1-5,26