睾丸Leydig干细胞分离、纯化及鉴定的体外研究

摘要：

目的 改进Leydig干细胞的分离及纯化方法,观察其生物学特性并进行鉴定.方法　通过胶原酶消化、差速贴壁法及双抗体免疫磁珠分选法,从大鼠睾丸内获得Leydig干细胞.以条件培养液进行培养,采用CCK法测定增殖能力.通过PDGFRα、LIFR及3β-HSD免疫组织化学染色鉴定Leydig干细胞.经定向诱导分化后,检测Leydig细胞的睾酮分泌能力.结果　每个睾丸约可获得83 000个干细胞,经免疫组织化学染色分析,PDGFRα阳性率为(98.0±0.8)％.在条件培养液中培养的SLCs增殖明显,在1个月内能稳定维持其干性而未向Leydig细胞系分化.免疫组织化学染色结果表明,PDGFRα、LIFR阳性表达,3β-HSD为阴性表达.Leydig干细胞在含有T3和HCG的培养液中培养后,第5天即可测到睾酮分泌,分化后的细胞3β-HSD+.结论　 由差速贴壁法及双抗体免疫磁珠分选法能获得纯化的PDGFRα+/LHRˉ细胞,这些细胞符合SLCs所必须具有的特征.采用该方法获取SLCs,操作简便,细胞损伤小并且获取纯度高.

关键词：Leydig干细胞、磁性活化细胞分选、细胞培养、分化、鉴定

所属期刊栏目：7

分类号：Q813.1+1(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金30970736

在线出版日期：2011-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：186-190,206