萤火虫荧光素酶报告基因重组逆转录病毒载体的构建及鉴定

摘要：

目的 构建含萤火虫荧光素酶报告基因的逆转录病毒载体,为进一步研究生物发光活体动物体内光学成像奠定基础.方法 利用重组DNA技术,将荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic双酶切得到的目的 基因fluc+亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN中,重组质粒pL(fluc)SN在脂质体介导下"乒乓"转染GP+E86和PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆.扩大培养,测定病毒滴度,并检测荧光素酶活性.结果 经限制性酶切分析鉴定,载体插入基因大小、位置均正确,并用GP+E86和PA317细胞进行包装、病毒滴度测定、筛选,建立具有较高滴度的重组逆转录病毒fluc细胞系,该细胞可高效表达荧光素酶.结论 成功构建了重组质粒pL(fluc)SN,为标识干细胞进行基础研究提供了一种检测方法 和平台.

关键词：荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic、重组逆转录病毒载体pLXSN、构建

所属期刊栏目：5

分类号：Q784(基因工程（遗传工程）)

资助基金：自然科学基金青年基金面上项目30400182;国家高技术发展计划863项目2007AA02Z454

在线出版日期：2009-07-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：75-78