GST-NAP融合蛋白可溶性表达及柱上切割GST标签

摘要：

利用基因工程的方法,以实验室保存的pMAL-C2X-NAP质粒为模板,PCR扩增NAP基因,构建重组质粒pGEX-NAP.重组质粒通过酶切和测序鉴定后转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),再经IPTG低温诱导获得可溶性GST-NAP融合蛋白,最后利用谷胱甘肽琼脂糖凝胶树脂进行纯化,Prescission蛋白酶进行柱上切割去除GST标签.结果表明,pGEX-NAP重组质粒构建正确,在大肠杆菌中经IPTG低温诱导表达,可获得大量可溶性GST-NAP融合蛋白. Prescission蛋白酶柱上切割去除GST标签后,经Western Blot 验证NAP蛋白能被兔抗NAP多克隆抗体特异识别.

关键词：GST-NAP、重组质粒、蛋白表达、GST标签

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：重大新药创制科技重大专项基金项目,编号2012ZX09103301-022;国家自然科学基金资助项目,编号U1204817,81373119

在线出版日期：2016-03-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：94-98