肝郁脾虚方对抑郁失眠模型大鼠结肠组织GABA能信号系统及肠道菌群的影响

摘要：

目的 探究肝郁脾虚方治疗抑郁共病失眠的可能作用机制.方法 24只SD大鼠随机分为空白组,模型组及肝郁脾虚方低、高剂量组,每组6只.除空白组外,其余各组均采用慢性不可预知温和应激方法(CUMS)干预21天构建抑郁模型,再注射4-氯-DL-苯丙氨酸(PCPA)3天构建抑郁失眠大鼠模型.造模后肝郁脾虚方低、高剂量组分别予以肝郁脾虚方8、32g/(kg·d)灌胃,空白组及模型组以蒸馏水20ml/(kg·d)灌胃,共灌胃14天.采用实时荧光定量PCR检测大鼠结肠组织γ-氨基丁酸A型受体(GABAA)、γ-氨基丁酸B型受体(GABAB)、γ-氨基丁酸转运蛋白(GAT)、谷氨酸脱羧酶(GAD)mRNA表达,Western blot法检测大鼠结肠组织中GABAA、GABAB、GAT、GAD蛋白表达.通过16SRNA基因测序技术分析大鼠肠道菌群物种多样性及物种组成.Pearson相关性分析γ-氨基丁酸(GABA)能信号系统与优势菌门的相关性.结果 与空白组比较,模型组大鼠结肠组织GABAA、GABAB蛋白及mRNA表达降低,GAD蛋白及mRNA、GAT蛋白表达升高(P＜0.05).与模型组比较,肝郁脾虚方高、低剂量组GABAA蛋白及mRNA表达升高,GABAB mRNA表达升高、蛋白表达下降,GAD mRNA表达降低,GAT蛋白表达下降(P＜0.05).与肝郁脾虚方低剂量组比较,肝郁脾虚方高剂量组GABAA、GADmRNA表达升高,GABAB蛋白表达降低(P＜0.05).各组均未检测到GAT mRNA表达.Alpha多样性结果显示,与模型组比较,肝郁脾虚方低、高剂量组Shannoneve指数升高,Simpson指数降低(P＜0.05).Beta多样性结果显示,肝郁脾虚方低剂量组菌群结构更接近空白组.物种组成结果显示,各组均存在的优势菌门为厚壁菌门、拟杆菌门.Pearson相关分析显示,厚壁菌门丰度与GAD mRNA表达呈负相关(r=-0.65,P=0.02),与GABAA蛋白表达呈负相关(r=-0.80,P=0.02),拟杆菌门丰度与 GADmRNA(r=0.79,P=0.02)、GABAB mRNA 呈正相关(r=0.69,P=0.01),与 GABAA 蛋白表达呈正相关(r=0.63,P=0.02).结论 肝郁脾虚方治疗抑郁共病失眠可能是通过调节肠道微生物分布,同时上调GABAA蛋白,下调GABAB、GAT蛋白实现的,且低剂量较高剂量更佳.

关键词：抑郁症、失眠、肝郁脾虚方、γ-氨基丁酸能信号系统、肠道菌群

所属期刊栏目：64

分类号：R285.5;R742.1;R541.6

资助基金：国家自然科学基金;全国基层名老中医药专家传承工作室建设项目;江西省中医药中青年骨干人才培养计划;江西省中医药管理局科技计划

在线出版日期：2023-07-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1273-1281