基于Wnt通路探讨温阳化浊方含药血清对Ishikawa和JAr细胞胚胎种植模型的影响

摘要：

目的 探讨温阳化浊方促进胚胎种植的可能作用机制.方法 将20只大鼠随机分为温阳化浊方组和空白组,每组10只.温阳化浊方组大鼠给予温阳化浊方药液21.05 g/kg连续灌胃7天,空白组不予灌胃,制备温阳化浊方含药血清和空白血清.体外培养THP-1单核细胞,佛波酯(PMA)诱导分化成巨噬细胞,再用20ng/ml脂多糖(LPS)和20 ng/ml γ干扰素(IFN-γ)诱导巨噬细胞M1极化.M1型巨噬细胞分别加入2％、4％、8％、10％、15％、20％的温阳化浊方含药血清和空白血清培养,采用CCK8法检测细胞存活率,选取最大无毒剂量的温阳化浊方含药血清进行后续实验.M1型巨噬细胞分为:模型1组、温阳化浊方含药血清1组、空白血清1组,在诱导M1极化后,温阳化浊方含药血清1组给予筛选浓度的温阳化浊方含药血清,空白血清1组给予同浓度的空白血清,各组均干预24h和48h,Real-time PCR法检测M1型巨噬细胞标志物肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和M2型巨噬细胞标志物趋化因子配体18(CCL-18)、甘露糖受体C型1(MRC-1)mRNA表达.采用Transwell体系共培养M1型巨噬细胞、Ishikawa细胞和JAr细胞,建立体外胚胎种植模型.将胚胎种植模型细胞分为:非容受态组(只包含Ishikawa细胞)、容受态组(包含Ishikawa细胞和JAr细胞)、模型2组(M1型巨噬细胞与Ishikawa细胞、JAr细胞共培养)、温阳化浊方含药血清2组和空白血清2组.温阳化浊方含药血清2组和空白血清2组在M1型巨噬细胞与Ishikawa细胞共培养的同时,分别给予筛选浓度的温阳化浊方含药血清和空白血清干预48h,再与JAr细胞共培养.Real-time PCR方法检测Wnt通路相关因子Wnt4、Wnt6、Wnt7b、Wnt11、β-连环蛋白(β-catenin)和子宫内膜容受性标志分子整合素αV(ITGαV)、整合素β3(ITGβ3)、整合素β5(ITGβ5)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、L-选择素(L-selectin)的mRNA表达;免疫荧光法检测Wnt通路下游分子原癌基因(C-Jun)、间质上皮转换因子(Met)、淋巴细胞增强结合因子1(LEF1)的表达;因非容受态组无Jar细胞球黏附,观察其余各组的Jar细胞黏附率.结果 根据细胞存活率结果,选择10％温阳化浊方含药血清进行后续实验.干预48h时,与模型1组比较,温阳化浊方含药血清1组TNF-α和IL-1βmRNA表达显著降低,CCL-18和MRC-1 mRNA表达显著升高(P＜0.01),空白血清1组TNF-αmRNA表达显著降低(P＜0.05);与温阳化浊方含药血清1组比较,空白血清1组CCL-18和MRC-1 mRNA表达均显著降低(P＜0.01).与非容受态组比较,容受态组细胞中 Wnt4、Wnt6、Wnt7b、Wnt11、β-catenin、ITGαV、ITGβ3、ITGβ5、E-cadherin、L-selectin mRNA及C-Jun蛋白表达显著升高(P＜0.05或P＜0.01);与容受态组比较,模型2组Wnt4、Wnt6、Wnt7b、Wnt11、β-catenin、ITGαV、ITGβ3、ITGβ5、E-cadherin、L-selectin mRNA及C-Jun蛋白表达,Jar 细胞的黏附率显著降低(P＜0.05或P＜0.01);与模型2组比较,温阳化浊方含药血清2组Wnt4、Wnt6、Wnt7b、Wnt11、β-catenin、ITGαV、ITGβ3、ITGβ5 mRNA及C-Jun蛋白表达,Jar细胞的黏附率均显著升高(P＜0.01),空白血清2组各指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 温阳化浊方含药血清通过抑制M1型巨噬细胞极化,上调Wnt通路,提高子宫内膜容受性,从而促进慢性子宫内膜炎的胚胎种植.

关键词：慢性子宫内膜炎、胚胎种植、温阳化浊方、子宫内膜容受性、巨噬细胞、极化、Wnt通路

所属期刊栏目：63

分类号：R737.33;R392.11;R285.5

资助基金：国家自然科学基金81774351

在线出版日期：2022-11-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：1975-1984