旋覆代赭汤含药血清对食管平滑肌细胞5-羟色胺4受体、环磷酸腺苷及钙离子浓度的影响

摘要：

目的 探讨旋覆代赭汤治疗反流性食管炎的可能作用机制.方法 40只大鼠随机分为旋覆代赭汤低、中、高剂量组及空白组,每组10只,旋覆代赭汤低中高剂量组给药量分别为4.71、9.42、18.84g/(kg·d),每日1次,连续灌胃3天,空白组给予10 ml/(kg·d)生理盐水灌胃.末次灌胃后腹主动脉取血,分离血清.旋覆代赭汤各剂量组分别设5％、10％、20％、30％共4个浓度,采用CCK-8法检测各浓度对食管平滑肌细胞(ESMC)增殖的影响,并筛选最佳给药浓度.原代培养ESMC,在运用5-羟色胺4受体(5-HT4R)激动剂(马来酸替加色罗)和抑制剂(GR113808),及腺苷酸环化酶(AC)的激动剂(Forskolin)和抑制剂(SQ22536)干预5羟色胺(5-HT)通路的信号传导,再用筛选出的旋覆代赭汤含药血清孵育,ELISA法检测胞内环磷酸腺苷(cAMP)含量,免疫荧光法检测5-HT4R荧光强度,Ca2+探针检测细胞内Ca2+浓度.结果 5％旋覆代赭汤低剂量组对ESMC的增殖作用最强,故选取用于后续实验.与5-HT4R激动剂组比较,5-HT4R激动剂加中药组Ca2+荧光增强比值增加(P＜0.01).与AC激动剂组比较,AC激动剂加中药组5-HT4R荧光强度、Ca2+荧光强度显著增加(P＜0.01).与5-HT4R抑制剂组比较,5-HT4R抑制剂加中药组5-HT4R荧光强度、Ca2+荧光增强比值、cAMP浓度均增加(P＜0.05或P＜0.01).与AC抑制剂组比较,AC抑制剂加中药组5-HT4R荧光增强比值、Ca2+荧光强度、cAMP浓度均增加(P＜0.05或P＜0.01).结论 旋覆代赭汤可能是通过增加5-HT4R表达,继而激活AC,促进cAMP释放,使胞内Ca2+浓度升高,引起食管平滑肌收缩,从而减轻反流.

关键词：反流性食管炎、旋覆代赭汤、食管平滑肌细胞、5-羟色胺4受体、环磷酸腺苷、钙离子

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资助基金：浙江省自然科学基金LY17H270017;浙江省中医药科技计划项目2016ZA046

在线出版日期：2019-11-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1679-1683