Ⅰ型与Ⅱ型胶原酶在原代成骨细胞培养中消化效果的对比研究

摘要：

目的:比较Ⅰ型与Ⅱ型胶原酶在原代成骨细胞培养中的消化效果.方法:取6只新生24 h内的SD大鼠,处死后取出颅盖骨并制成碎骨片.将碎骨片等分成2份,标记为Ⅰ组和Ⅱ组,分别用0.1％Ⅰ型胶原酶和0.1％Ⅱ型胶原酶在37℃消化2次,每次1h.将2次消化所得到的细胞悬液混匀后进行细胞培养,并对2组细胞分别进行细胞计数,观察细胞形态、细胞增殖情况及碱性磷酸酶染色情况,并测定碱性磷酸酶含量.结果:①细胞计数.Ⅰ组细胞3次细胞计数结果分别为6.20×105个·mL-1、6.00×105个·mL-1、5.90×105个·mL-1；Ⅱ组细胞3次细胞计数结果分别为3.20 × 105个·mL-1、3.40×105个·mL-1、2.90×105个·mL-1.Ⅰ组细胞总量为Ⅱ组细胞总量的2倍左右.②细胞形态.2组细胞多呈梭形,表面有2～3个突触与周围细胞相联系,2组细胞形态无明显差异.③细胞增殖.Ⅰ组光密度(0.492±0.001)与Ⅱ组光密度(0.491 ±0.002)比较,差异无统计学意义(=0.379,P=0.713).④碱性磷酸酶染色.2组细胞用苏木素染色后,胞浆内均可见明显的咖啡色和红棕色颗粒.⑤碱性磷酸酶含量.Ⅰ组碱性磷酸酶含量[(2.929±0.024)金氏单位]与Ⅱ组[(2.933 ±0.024)金氏单位]比较,差异无统计学意义(t=0.389,P=0.706).结论:Ⅰ型胶原酶和Ⅱ型胶原酶均适用于成骨细胞的原代消化,但在消化1h×2次条件下用Ⅰ型胶原酶容易获得更多的成骨细胞.

关键词：成骨细胞、细胞培养技术、胶原酶类、动物实验

所属期刊栏目：25

分类号：R28;R68

资助基金：浙江省自然基金Y2110928;浙江省中医药科学研究基金计划2010ZA020

在线出版日期：2013-08-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：6-9