华泽兰根部乙酸乙酯萃取物基于NF-κB及NLR-P3炎症小体信号通路对NIH-3T3小鼠胚胎成纤维细胞功能的影响

摘要：

目的 探讨华泽兰乙酸乙酯萃取物对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH-3T3)功能的影响.方法 从炎症因子一氧化氮(NO)及氧化应激重要因素活性氧(ROS)介入,通过核因子κB(NF-κB)及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLR-P3)炎症小体等信号通路角度阐明其作用机制.体外培养NIH-3T3细胞,分为空白对照组(Control)、不同浓度华泽兰根部乙酸乙酯萃取物组,检测不同浓度下华泽兰根部乙酸乙酯萃取物对NIH-3T3细胞Toll增殖活性(MTT法)、细胞迁移(细胞划痕实验)、分泌NO及胞内ROS生成的影响,Western blot法检测其对Toll样受体4(TLR-4)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、NLR-P3、NF-KB、髓样分化因子(Myd88)、核因子抑制蛋白 α(IκBα)、白细胞介素-18(IL-18)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、环氧化酶-2(COX-2)蛋白表达的影响.结果 细胞增殖与细胞划痕实验表明,华泽兰根部乙酸乙酯萃取物对于NIH-3T3细胞的增殖与划痕愈合影响具有双向性.与对照组相比在低浓度下(＜6.25 μg·mL-1),萃取物有促进NIH-3T3细胞增殖与迁移的作用,而高浓度(＞25μg·mL-1)反而表现出对NIH-3T3细胞的增殖与迁移抑制作用,且不同阶段呈现出相应的剂量依赖性,与对照组相比有统计学意义(P＜0.05).在萃取物浓度为6.25μg·mL-1时,NO生成量相较于低浓度组差异有显著统计学意义(P＜0.01),而高浓度组(＞12.5 μg·mL-1)相较对照组差异无统计学意义(P＞0.05).细胞内ROS生成实验表明,经华泽兰根部乙酸乙酯萃取物处理后ROS生成量显著高于对照组(P＜0.05,P＜0.01).Western blot实验表明,与对照组相比,萃取物作用浓度为6.25μg·mL-1时,细胞内NF-κB、TLR-4、Myd88、NLR-P3、ASC表达显著升高(P＜0.01),IKBα表达升高(P＜0.05),IL-18表达显著降低(P＜0.01),Caspase-3表达降低(P＜0.05).结论 华泽兰乙酸乙酯萃取物对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH-3T3)增殖的影响具有双向性,即低浓度促进细胞增殖而高浓度抑制细胞增殖.其作用机制可能与NF-κB及NLR-P3炎症小体信号通路和细胞凋亡有关.

关键词：华泽兰、NIH-3T3细胞、细胞功能、NF-κB、炎症小体

所属期刊栏目：41

分类号：R282.71(中药学)

资助基金：国家自然科学基金21272136

在线出版日期：2023-06-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：144-150,后插30-后插31