毛蕊异黄酮对流感病毒感染HUVEC细胞通透性及其MLC磷酸化的影响

摘要：

目的:通过检测毛蕊异黄酮(Calycosin)对流感病毒A/PR/8/34(H1N1)感染的脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVECs)通透性升高及其肌球蛋白轻链(MLC)磷酸化的影响来探讨其改善内皮细胞通透性的机制.方法:设置正常组、病毒组和毛蕊异黄酮组;将HUVEC接种于96孔板,MTT法检测不同浓度毛蕊异黄酮的细胞毒性;30 MOI PR8病毒感染病毒组与毛蕊异黄酮组HUVECs后,毛蕊异黄酮组加入20μg/mL毛蕊异黄酮溶液,采用内皮细胞跨膜电阻法检测各组在不同时间点的跨膜电阻值;激光共聚焦显微镜观察各组细胞内丝状肌动蛋白(Filamentous actin,F-actin)的表达和分布;Western Blot检测各组MLC、p-MLC蛋白表达水平;将MDCK接种于96孔板,用PR8病毒感染细胞,MTT法检测不同浓度毛蕊异黄酮的抗病毒活性.结果:毛蕊异黄酮对HUVEC的最大无毒浓度为40 μg/mL,细胞存活率约为91.69％;毛蕊异黄酮组细胞通透性与正常组细胞相比无显著差异,但通透性显著低于病毒组(P＜0.05);病毒组的F-actin发生变构、细胞中出现粗大的应力纤维,分布于胞浆中,而毛蕊异黄酮组的F-actin分布于细胞膜、应力纤维减少;与正常组相比,病毒组的p-MLC蛋白表达显著增加,差异有统计学意义(P＜0.05)、与病毒组相比,毛蕊异黄酮组的p-MLC蛋白表达明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05);毛蕊异黄酮对流感病毒感染的MDCK细胞的抗病毒作用并不明显.结论:毛蕊异黄酮可通过抑制p-MLC蛋白的表达来抑制流感病毒引起的内皮细胞通透性升高及F-actin变构的作用,从而达到保护内皮细胞的功能.

关键词：毛蕊异黄酮、流感病毒、HUVEC、细胞通透性、MLC

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分类号：R285.5;R511.7(中药学)

资助基金：国家自然科学基金81473520

在线出版日期：2019-07-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1368-1372,后插11-后插12