温化蠲痹方作用于鸟嘌呤释放蛋白1影响微小RNA-146a对胶原诱导性关节炎大鼠外周血单个核细胞DNA甲基化调控作用研究

摘要：

目的:研究鸟嘌呤释放蛋白1(RASGRP1)在中药温化蠲痹方影响微小RNA-146a(miRNA-146a)对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠外周血单个核细胞(PBMC)DNA甲基化调控中的作用,探讨温化蠲痹方治疗CIA作用机制.方法:随机将健康雌性Wistar大鼠分为造模组和正常对照组(n=10,正常组),造模组在大鼠尾根部注射牛Ⅱ型胶原乳剂,建立胶原诱导性关节炎模型.30只造模成功大鼠随机分组如下:模型组(n=10)、甲氨蝶呤组(n=10,MTx组)及中药温化蠲痹方组(n=10,中药组).中药组大鼠按22.9 g/(kg·d)灌胃中药温化蠲痹方,模型组给予生理盐水灌胃,两组大鼠都是每天1次,MTx组灌胃MTx混悬液(0.78 mg/kg),每周1次,共观察30 d.采用容积法(排水体积)评价足趾肿胀度.给药结束后,对正常组、模型组PBMC细胞培养,模型组加入ras-MARKs阻断剂,阻断荆①SB230580、阻断剂②PD98059、阻断剂③SP600125,模型组加中药,正常组转染miRNA-146a,模型组转染反义miRNA-146a.采用实时定量PCR法检测miRNA-146a、DNMTs(DNMT1、DNMT3a、DNMT3b)表达水平,Western Blot检测RASGRP1表达.结果:(1)与正常组比较,模型组大鼠足趾肿胀明显,差异有统计学意义(P＜0.01);与模型组比较,中药组和MTX组大鼠足趾肿胀明显减轻,差异有统计学意义(P＜0.01);MTX组与中药组比较,大鼠足趾肿胀差异无统计学意义(P＞0.05);与治疗前比较,中药组和MTX组大鼠足趾肿胀减轻,差异有统计学意义(P＜0.01).(2)体内实验:与正常组比较,模型组大鼠外周血RASGRP1表达升高,差异有统计学意义(P＜0.01).与模型组比较,中药组、MTX组RASGRP1表达降低,差异有统计学意义(P＜0.01).中药组、MTX组之间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).体外实验:与正常组比较,模型组、正常转染miRNA-146a组PBMC RASGRP1表达升高,差异有统计学意义(P＜0.01).与模型组比较,模型加中药组、模型转染反义miRNA-146a组RASGRP1表达降低,差异有统计学意义(P＜0.01).与模型组比较,模型加阻断剂①组、加阻断剂②组、加阻断荆③组PBMC RASGRP1表达降低,差异有统计学意义(P＜0.01).(3)相关性分析:模型组、模型加阻②、③、加中药组、转染miRNA-146a组、转染反义miRNA-146a组大鼠PBMC miRNA-146a表达水平与DNMT1、DNMT3a、DNMT3b呈显著负相关.结论:温化蠲痹方可能作用于RASGRP1影响ras-MARKs通路,发挥对微小RNA-146a调控CIA大鼠PBMC DNA甲基化作用,是其治疗胶原诱导性关节炎作用机制之一.

关键词：胶原诱导性关节炎、外周血单个核细胞、DNA甲基化转移酶、miRNA-146a、RASGRP1、温化蠲痹方

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分类号：R285.5(中药学)

资助基金：浙江省自然科学基金;浙江省自然科学基金;浙江省中医药科技计划;浙江省中医药科技计划;浙江省中医药科技计划;杭州市医药卫生科技计划;杭州市医药卫生科技计划;杭州市科技发展计划;杭州市科技发展计划

在线出版日期：2019-03-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：10-14