活血荣络方对Aβ25-35损伤神经胶质细胞Wnt5α、Fz5、CaMKⅡ表达的影响

摘要：

目的:旨在通过细胞实验,从Wnt5a-Fz5-CaMKⅡ通路揭示活血荣络方治疗阿尔茨海默病(AD)的分子机制,为中医药治疗阿尔茨海默病提供新思路、新方法.方法:分别将Aβ25-35损伤星形胶质细胞铺板,以(2.5 ～3)×104/孔的密度接种到96孔板中,并随机分为6组,分别为2倍活血荣络方组、1倍活血荣络方组、0.5倍活血荣络方组、多奈哌齐组、sFRP组、空白组;待细胞的融合率为85％～ 90％时,含药组分别给予相应的含药血清,sFRP组给予sFRP,空白组予以空白血清.取生长对数期细胞加相应刺激分别处理12、24、48、72 h.分别取细胞上清液分离细胞,用MTT法检测细胞毒力,用流式细胞术检测细胞凋亡;用化学免疫法检测Wnt5、Fz5、CaMKⅡ的含量.结果:各组OD值随着时间的延长而增高,2倍活血荣络方组72 hOD值明显高于12 h(P ＜0.05),而空白组、sPRF组、2倍、0.5倍活血荣络方组、多奈哌齐组4个时间点见无明显差异(P＞0.05);各给药组细胞活性均高于空白组(P＜0.05),其中2倍活血荣络方组细胞活性最高;sFRP组细胞活性低于空白组(P＜0.05).各组细胞凋亡数目随着时间的延长而增高,其中空白组72 h细胞凋亡比例高于12 h(P ＜0.05),sPRF组72 h细胞凋亡比例明显高于12 h;2倍、1倍活血荣络方组、0.5倍活血荣络方组、多奈哌齐组4个时间点见无明显差异(P＞0.05);各给药组细胞凋亡比例明显低于空白组及sPRF组,其中2倍活血荣络方组细胞活性最高;sFRP组细胞凋亡比例高于空白组(P＜0.05).各给药组Wnt5α、Fz5、CaMKⅡ的表达均高于空白组(P＜0.05),其中2倍活血荣络方组Wnt5α表达明显高于空白组(P＜0.01),空白组明显高于sPRF组(P＜0.05);其它给药组间比较:2倍活血荣络方组明显高于1倍活血荣络方组、多奈哌齐组及0.5倍活血荣络方组(P＜0.01),1倍活血荣络方组与多奈哌齐组Wnt5α表达程度无明显差异(P＞0.05),此两组Wnt5α表达均高于0.5倍活血荣络方组(P＜0.05).结论:活血荣络方能有效提高Wnt5α、Fz5、CaMKⅡ的表达,减轻神经毒性的积累及细胞凋亡反应的发生,保护神经胶质细胞,延缓AD发病进展,其中以2倍活血荣络方效果最佳.

关键词：活血荣络方、阿尔茨海默病、Wnt5q、Fz5、CaMKⅡ、Aβ25-35损伤神经胶质细胞

所属期刊栏目：34

分类号：R258.8(中医内科)

资助基金：湖南省教育厅一般项目;实验室开放基金

在线出版日期：2016-11-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：2438-2441,后插10-后插12