miR-223对粒细胞性白血病细胞增殖影响及作用机理
通过在体外将miR-223 duplex转染至粒系白血病细胞株(HL-60、NB4),观察其对粒系白血病细胞增殖作用的影响.来探讨miR-223对白血病细胞诱导分化及作用机理.以白血病HL-60、NB4细胞株为靶细胞,采用MTT法和半固体集落法观察不同浓度的miR-223对HL-60、NB4细胞增殖的影响;流式细胞术观察粒系细胞分化的表面标志(CD11b+、CD15+)表达;RT-PCR检测miR-223对c/EBPα、NFI-A转录因子表达的影响以及用免疫印迹反应观察相应蛋白的表达情况.结果表明:(1)低浓度的miR-223(10nM、20nM)均抑制HL-60、NB4细胞增殖(P<0.05或P<0.01),但在HL-60细胞中随着其浓度的增加(50nM、100nM),抑制作用与对照组相比元差异;而NB4细胞中随浓度增加抑制作用却没有增强(P<0.05).半固体集落培养结果显示与MTT结果相一致.(2)流式细胞术检测用不同浓度的miR-223转粢粒系细胞中发现,粒系细胞表面标志CD11b+表达在低浓度(10nM、20nM)下随其浓度升高而增加,但浓度增至50nM、100nM时表达有所下降;而CD15+在HL-60细胞中表达无显著差异,NB4细胞中表达趋势与CD11b+一致.(3)两细胞在miR-223作用前后提取总RNA分别进行RT-PCR检测显示,NB4细胞中NFI-A转录因子表达随浓度增加而降低,分别低于未经处理的0.6倍、2.0倍、1.1倍和1.5倍.c/EBPα基因表达随浓度增加而增加,分别是未经处理细胞的1.5倍、2.0倍、1.8倍和2.0倍.而在HL-60细胞中c/EBPα基因表达无明显差异,NFI-A仅在20nM浓度下表达下降差异显著,低于未经处理细胞的3.0倍.对NB4细胞中的NFI-A蛋白免疫印迹分析发现,经miR-223处理过的细胞中NFI-A蛋白含量随浓度增加而有所下降.结论:转染一定浓度miR-223至粒系白血病细胞中,能够抑制恶性细胞克隆增殖,其作用机制有可能通过竞争性抑制NFI-A转录因子表达,恢复与分化相关的c/EBPα转录因子的表达,来诱导粒系白血病细胞向成熟方向分化.
miR-223、HL-60、NB4、CD11b+、c/EBPα、NFI-A
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R285.5(中药学)
卫生部科研项目;浙江省自然科学基金;浙江省自然科学基金重点项目
2010-12-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
2044-2050
