大鼠细胞色素P450-2J3基因的克隆及其在293细胞中的表达

摘要：

目的克隆大鼠CYP2J3基因并构建pcDNA 3.1(+)-CYP2J3真核表达载体,检测其在293细胞中的表达.方法提取大鼠肝脏组织总RNA,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和重叠延伸聚合酶链反应(0E-PCR)扩增大鼠CYP2J3基因,克隆入真核表达载体pcDNA 3.1(+).脂质体转染293细胞,用Western lbotting鉴定其在293细胞表达.结果运用RT-PCR和0E-PCR获得CYP2J3基因开放读码框架(0RF)全长序列,经酶切鉴定正确.测序结果与基因Gen Bank提交序列完全一致并成功构建真核表达载体pcDNA 3.1(+)-CYP2J3.Western blotting结果显示,转染pcDNA 3.1(+)-CYP2J3后的293细胞能稳定有效表达CYP2J3蛋白.结论大鼠CYP2J3基因的成功克隆以及pcDNA3.1(+)-CYP2J3载体的成功构建,为CYP2J3基因的功能研究和相关疾病的研究提供了可行的工具.

关键词：CYP2J3、基因克隆、聚合酶链反应、转染、基因表达、重叠延伸聚合酶链反应

所属期刊栏目：33

分类号：R3(基础医学)

在线出版日期：2006-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：6-9