NPM1A型突变体对TGF-β1诱导K562细胞活力及AKT磷酸化水平的影响

摘要：

目的 观察核仁磷酸蛋白1(nucleophosmin 1,NPM1)A型突变体过表达对TGF-β1诱导的K562细胞活力及AKT磷酸化水平的影响.方法 将携带NPM1 A型突变体的腺病毒荧光载体(Ad5-NPM1)感染髓系白血病K562细胞,建立过表达NPM1蛋白的K562细胞株.利用Western blot法及ELISA法分别检测细胞NPM1蛋白表达及上清液蛋白含量;利用Western blot法检测TGF-β1处理对K562细胞AKT、P-AKT蛋白表达的影响.MTT法检测细胞活力;Western blot法测定细胞内NPM1、AKT、P-AKT蛋白水平.结果 重组腺病毒载体Ad5-NPM1感染K562细胞荧光强度随感染复数(multiplicity of infection,MOI,30～200)增加而增强,转染第3天即观察到细胞内绿色荧光信号.K562细胞NPM1蛋白表达水平呈Ad5-NPM1感染复数(30～200)依赖性增加(r=0.85),与空载组(Ad5-vector-100)相比,Ad5-NPM1-30、Ad5-NPM1-100组的NPM1蛋白表达水平均显著增高(P＜0.01).ELISA结果也显示K562细胞上清液NPM1蛋白水平呈Ad5-NPM1感染复数(30～200)依赖性增加(r=0.92),与空载组(Ad5-vector-100)相比,Ad5-NPM1-30、Ad5-NPM1-100组K562细胞上清液NPM1蛋白含量均显著增高(P＜0.01).TGF-β1(10 ng/ml)能够时间依赖性诱导K562细胞AKT蛋白磷酸化,但对总AKT水平没有明显影响.单TGF-β1处理组与TGF-β1(10 ng/ml)+ Ad5-Vector-100组细胞内P-AKT水平的差异无统计学显著性(P＞0.05),而TGF-β1(10 ng/ml)+Ad5-NPM1-100组K562细胞P-AKT水平显著高于单TGF-β1处理组(P＜0.05),各组总AKT水平未见明显差别(P＞0.05).与空白对照(CT)组相比,TGF-β1(10 ng/ml)处理可促进K562细胞的活力;但TGF-β1(10 ng/ml)+ Ad5-NPM1-100组细胞的活力水平明显高于单TGF-β1处理组(P＜0.01).结论 NPM1能促进TGF-β1诱导的K562细胞的活力.NPM1促进TGF-β1诱导的K562细胞的生长可能与AKT磷酸化有关.

关键词：NPM1、K562细胞、TGF-β1、P-AKT、细胞活力

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资助基金：福建省科技厅社会发展重点项目2013Y0086Social Development Key Projects of Fujian Science and Technology Department 2013Y0086

在线出版日期：2019-07-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：15-20