基于非靶向代谢组学技术探讨Yes相关蛋白1改善马兜铃酸I诱导小鼠肝损伤的机制

摘要：

目的 基于非靶向代谢组学技术探讨Yes相关蛋白 1(YAP1)改善马兜铃酸I(Aristolochic acid I,AAI)诱导小鼠肝损伤的机制.方法 随机选取 8 只 3 周龄雄性肝细胞特异性Yap1 基因敲除(基因型为Yap1Flox/Flox,Albumin-Cre,简称Yap1LKO)小鼠作为Yap1LKO+AAI组,8 只Yap1Flox对照小鼠作为Yap1Flox+AAI组.2 组小鼠均按照 2.5 mg·kg-1·d-1 剂量腹腔注射AAI,连续 14 d.采用鼠尾PCR法鉴定基因型;微板法测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性;HE染色法观察肝脏组织病理变化;免疫组织化学法测定肝组织中YAP1 蛋白表达情况.采用非靶向代谢组学方法分析肝脏组织差异代谢物,利用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用技术分析样品,通过主成分分析(PCA)、偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)筛选差异代谢物,利用HMDB数据库、METLIN数据库对代谢物进行鉴定,通过KEGG数据库对差异代谢物进行通路富集分析.结果 (1)AAI诱导 14 d,Yap1LKO小鼠的体质量增长低于Yap1Flox小鼠,但差异无统计学意义(P＞0.05).在第 14 天,与Yap1Flox+AAI组比较,Yap1LKO+AAI组小鼠血清中的ALT、AST酶活性明显升高(P＜0.05),肝脏组织病理损伤明显加重.Yap1Flox小鼠肝脏有YAP1蛋白阳性表达,而Yap1LKO小鼠无YAP1 蛋白阳性表达.(2)通过代谢组学分析共筛选出 139 种显著变化(VIP＞1且P＜0.05)的差异代谢物,与Yap1LKO+AAI组小鼠相比,Yap1Flox+AAI组小鼠的 62 种肝脏代谢物上调,包括胆碱、牛磺酸、亚牛磺酸、α-亚麻酸、桐油酸、鹅去氧胆酸等;77 种代谢物下调,包括甘油磷酸胆碱、L-磷脂酰胆碱、L-谷氨酰胺、L-丝氨酸、L-谷胱甘肽、5-甲硫腺、苯丙氨酸、6-磷酸葡萄糖、乳酸、尿酸苷等.KEGG富集通路主要有胆碱代谢、甘油磷脂代谢、胰岛素抵抗、谷胱甘肽代谢等.结论 肝细胞特异性Yap1基因敲除加重了AAI诱导的小鼠肝脏损伤,YAP1 通过上调胆碱、牛磺酸等不饱和脂肪酸,参与调控胆碱代谢、甘油磷脂代谢等,从而改善AAI诱导的小鼠肝损伤.

关键词：Yes相关蛋白1、马兜铃酸I、药物性肝损伤、代谢组学、胆碱代谢、小鼠

所属期刊栏目：35

分类号：R285.5(中药学)

资助基金：国家自然科学基金82274315

在线出版日期：2024-02-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：46-55