黑老虎抗炎有效部位筛选及机制研究

摘要：

目的 筛选黑老虎根的抗炎有效部位并探讨其抗炎机制.方法 采用热回流和超声萃取法制备黑老虎醇提乙酸乙酯萃取物(EC)和黑老虎乙酸乙酯提取物(ET);通过硅胶柱快速制备液相色谱仪分离纯化ET相关组分.采用脂多糖(LPS,100ng·mL-1)诱导RAW264.7巨噬细胞作为体外炎症模型.细胞分为空白对照组、LPS模型组及不同浓度黑老虎提取物预处理组,药物于LPS刺激前2 h加入培养基.采用MTT法检测细胞活性;ELISA法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及单核细胞趋化蛋白 1(MCP-1)水平;采用 Western Blot 及 qRT-PCR 法检测 COX-2、iNOS、NF-κB/MAPK 通路、Nrf2-HO-1/NQO-1通路相关蛋白及mRNA表达水平.结果 (1)EC、ET对LPS诱导的RAW264.7细胞NO生成的抑制率相近,二者的IC50值分别为34.07、34.69 μg·mL-1;与空白对照组比较,100μg·mL-1EC、ET组的细胞活力均显著降低(P＜0.001),而在1～50μg·mL-1 浓度范围EC、ET组的细胞活力均无明显变化(P＞0.05);与LPS模型组比较,ET50 μg·mL-1组细胞的IL-6水平明显降低(P＜0.05),ET30、50 μg·mL-1组细胞的MCP-1水平明显降低(P＜0.01,P＜0.001),具有明显的抗炎作用;而EC不同浓度组细胞的IL-6、MCP-1、TNF-α水平均无明显变化(P＞0.05).(2)采用快速制备液相色谱仪分离出ET的8个组分(ET1～ET8);ET2～ET8组分均有一定的抗炎活性,ET5对NO生成的抑制作用最强,IC50值为17.02 μg·mL-1;与LPS模型组比较,ET5 10、20、40 μg·mL-1 组细胞的 IL-6、MCP-1、TNF-α 水平均明显降低(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001);ET5 在 7.5～40μg·mL-1 浓度范围对有/无LPS诱导的RAW264.7细胞活性均无明显影响(P＞0.05).(3)与LPS模型组比较,20、40μg·mL-1 ET5 组细胞的 iNOSmRNA 及蛋白表达显著下调(P＜0.01,P＜0.001),10、20 μg·mL-1 ET5组细胞的COX-2 mRNA表达显著下调(P＜0.001),对COX-2蛋白表达无影响(P＞0.05);ET5各浓度组细胞的p65、IKBα、p38、ERK、JNK蛋白磷酸化无明显变化(P＞0.05);20、40μg·mL-1ET5组RAW264.7细胞的核内Nrf2蛋白表达及HO-1、NQO-1 mRNA表达均明显上调(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001).结论 ET5是黑老虎根抗炎作用的主要有效部位,其抗炎机制与激活Nrf2-HO-1/NQO-1通路有关.

关键词：黑老虎、抗炎作用、有效部位、乙酸乙酯提取物、Nrf2-HO-1/NQO-1通路、RAW264.7巨噬细胞

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分类号：R285.5(中药学)

资助基金：国家自然科学基金;湖南省自然科学基金项目;湖南省教育厅优秀青年项目;大学生创新创业训练计划项目;湖南省大学生创新创业训练计划项目

在线出版日期：2023-03-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：1589-1598