基于PXR/CAR调控通路探讨士的宁对UGT1A4的作用

摘要：

目的 研究士的宁对人肝细胞HL-7702中葡萄糖醛酸转移酶1A4(UGT1A4)表达的影响及其与孕烷X受体(PXR)/组成型雄烷受体(CAR)调控通路的关系,明确UGT1A4与士的宁的关系及作用机制,为进一步研究士的宁代谢及合成或改造相似结构药物提供一定的实验依据.方法 以人肝细胞株HL-7702为研究对象,不同浓度的士的宁(10、20、40 pmol·L-1)干预24 h后,RT-qPCR和Western Blot法检测士的宁对HL-7702细胞中UGT1A4、PXR和CAR mRNA和蛋白表达水平的影响.通过双荧光素酶报告基因法以及脂质体瞬时转染方法,分析UGT1A4报告基因(来自于瞬时共转染hCAR或者是hPXR之后的HL-7702细胞)的活性在各浓度士的宁(10、20、40 pmol·L-1)干预下的影响.利用siRNA干扰技术,探究士的宁对hPXR基因沉默后HL-7702细胞中UGT1A4蛋白表达水平的影响.结果 与对照组比,20、40 pmol·L-1 士的宁干预后明显上调UGT1A4、PXR的mRNA和蛋白的表达水平,呈浓度依赖性(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001);但对CAR mRNA和蛋白的表达无明显的影响,差异无统计学意义(P＞0.05).在瞬时共转染hPXR的HL-7702细胞中,20、40 pmol·L-1士的宁干预24 h后能明显上调PXR介导UGT1A4的转录活性,呈浓度依赖性(P＜0.01,P＜0.001);在瞬时共转染hCAR的HL-7702细胞中,各浓度士的宁干预24 h后对CAR介导的UGT1A4转录活性无明显影响,与对照组比,差异无统计学意义(P＞0.05).士的宁对沉默hPXR的HL-7702细胞中UGT1A4蛋白的诱导作用明显减弱,与对照组比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 士的宁对HL-7702中UGT1A4和PXR在转录和蛋白水平有明显的上调作用,对CAR在转录和蛋白水平没有明显影响.士的宁对HL-7702细胞中UGT1A4的诱导作用主要通过PXR调控通路实现.

关键词：士的宁;UGT1A4;PXR;CAR;人肝细胞株HL-7702

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分类号：R285.5(中药学)

资助基金：广东省自然科学基金项目;广东省中医药局科研项目;广州市中医药和中西医结合科技项目;广州市卫生健康科技一般引导项目;广东省药学会研究基金项目

在线出版日期：2021-09-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：925-931