盐酸巴马汀抑制NF-κB/p38 MAPK信号通路及NLRP3炎症小体抗炎机制研究

摘要：

目的 观察黄连异喹啉生物碱盐酸巴马汀在人急性单核白血病细胞(THP-1)中的抗炎活性,研究其对NF-κB/p38 MAPK信号通路以及NLRP3炎症小体的调控作用机制.方法 通过脂多糖(LPS)刺激THP-1细胞建立初筛模型,ELISA法测定细胞上清液中白细胞介素-6(IL-6)水平,初筛黄连中的小檗碱、黄连碱、药根碱、盐酸巴马汀和表小檗碱5种异喹啉生物碱对炎症细胞因子IL-6释放的抑制活性;采用MTT法测定盐酸巴马汀的作用浓度;Western Blot法测定盐酸巴马汀对LPS联合三磷酸腺苷(ATP)刺激THP-1细胞炎症模型中p-IκBα、IκBα、p-IKK、IKK、p-p38、p-38、p-JNK、JNK蛋白表达的影响,同时测定NLRP3、ASC和Caspase-1 p20蛋白的表达,并用Co-IP检测NLRP3炎症小体中pro-caspase-1和ASC的相互作用;ELISA法测定细胞因子IL-1β和IL-18的水平.结果 与空白对照组比较,模型组IL-6含量升高(P<0.01);与模型组比较,黄连碱组、小檗碱组和盐酸巴马汀组IL-6含量明显降低(P<0.01),由于黄连碱和小檗碱已被大量研究,故选取盐酸巴马汀进行机制研究;盐酸巴马汀在1～60μmol·L-1浓度范围对THP-1细胞生长没有明显影响(P>0.05),选取1、10、30μmol·L-1作为盐酸巴马汀低,中,高剂量.与空白对照组比较,模型组p-IκBα、p-IKK、p-p38、p-JNK、NLRP3、Caspase-1 p20蛋白表达明显升高(P<0.01),细胞因子IL-1β和IL-18分泌增加(P<0.01);与模型组比较,盐酸巴马汀中剂量组的p-IκBα、p-p38蛋白和盐酸巴马汀高剂量组的p-p38蛋白表达减少(P<0.05),盐酸巴马汀高剂量组p-IκBα、p-JNK、NLRP3和Caspase-1 p20蛋白的表达明显降低(P<0.01),pro-Caspase-1和ASC蛋白的相互作用减弱(P<0.01),细胞因子IL-1β和IL-18释放减少(P<0.01).结论 盐酸巴马汀降低THP-1细胞炎症模型中p-IκBα、p-p38、p-JNK、NLRP3和Caspase-1 p20蛋白的表达,干扰pro-caspase-1和ASC的绑定,减少IL-1β和IL-18的释放,说明盐酸巴马汀的抗炎作用机制与NF-κB/p38 MAPK信号通路和NLRP3炎症小体信号通路相关.

关键词：黄连、盐酸巴马汀、人急性单核白血病细胞、NLRP3炎性小体、核转录因子κB、p38丝裂原活化蛋白激酶

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分类号：R285.5(中药学)

资助基金：国家自然科学基金81773974

在线出版日期：2020-07-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：762-768