Ⅰ型HEV ORF3-pEGFPN1真核表达质粒的构建与鉴定

摘要：

目的:构建表达Ⅰ型HEV ORF3-pEGFPN1融合蛋白的真核表达载体;获得重组质粒稳定转染的LO2细胞系.方法:从猕猴胆汁提取RNA,利用RT-PCR及PCR技术从HEV基因组中扩增出ORF3基因片断,EcoR Ⅰ/BamH Ⅰ双酶切后连接到经同样酶切的pEGFPN1真核表达载体,转化DH5a菌株感受细胞,获得阳性重组质粒ORF3-pEGFPN1.将阳性克隆用脂质体法转染LO2细胞系,G418筛选抗性克隆,SDS-PAGE、Western blot 分析鉴定ORF3-pEGFPN1融合蛋白的表达.结果:真核表达质粒转染LO2细胞,SDS-PAGE显示在39.8kD左右蛋白表达量明显高于对照组,Western blot在39.8kD左右有一条强的棕色条带.结论:成功构建ORF3-pEGFPN1真核表达质粒,能在LO2细胞表达融合蛋白,为进一步研究该蛋白生物学功能奠定基础.

关键词：肝炎病毒、戊型、真核表达、融合蛋白

所属期刊栏目：19

分类号：R57;R73

资助基金：湖北省科技攻关项目2007AA301B26;武汉市科技攻关项目200761023424

在线出版日期：2009-07-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：151-153