表达谱基因芯片技术研究膦甲酸钠上调细胞凋亡蛋白酶激活因子-1基因的表达

摘要：

目的:了解膦甲酸钠(PFA)与细胞凋亡蛋白酶激活因子-1(APAF-1)基因启动子的关系,为PFA的作
用机制提供理论依据.方法:应用基因表达谱芯片技术对于膦甲酸钠刺激Jurkat细胞之后的基因表达谱进行研究.聚合酶链反应(PCR)扩增APAF-1基因启动子,命名为APAF-P.以T-A克隆法,将APAF-P基因片段连入载体pGEM-T.将获得的质粒pT-APAF-P,与报告质粒pCAT3-basic分别用KpnI和NheI双酶切后构建APAF-1启动子报告基因表达载体pCAT3-APPAF-P,以重组表达质粒pCAT3-APPAF-P瞬时转染Jurkat细胞,以转染pCAT3 basic的Ju-rkat细胞为阴性对照,PFA刺激后24小时收获细胞.用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞中氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性.结果:表达谱基因芯片研究结果表明,PFA可上调APAF-1基因表达水平达2.815倍.构建的报告载体pCAT3-APPAF-P经过序列分析和酶切鉴定正确.pCAT3-APAF-P和PFA瞬时转染的Jurkat细胞的CAT表达
活性是CAT3空载体的4.9倍,pCAT3-Weep的2.9倍.结论:PFA可以上调APAF-1启动子的活性,进而上调A-PAF-1基因的表达.为深入了解PFA的免疫调节作用及其在病毒的清除过程中的作用机制提供新的理论依据.

关键词：分子生物学、膦甲酸钠/药效学、细胞凋亡蛋白酶激活因子-1、基因芯片、上调

所属期刊栏目：13

分类号：R3(基础医学)

在线出版日期：2005-11-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：346-348,362