温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞凋亡的影响
目的 研究温化蠲痹方对微小核糖核酸-146a(miRNA-146a)/核因子κB(NF-κB)环路诱导胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)凋亡作用及其相关分子机制.方法 选用雌性Wistar大鼠25只,按随机数字表法分为正常组(10只)和造模组(15只),造模组采用尾部皮内多点注射牛Ⅱ型胶原乳剂的方法进行免疫,建立CIA模型.在造模成功后(12只,造模成功率为80％)随机选取10只作为模型组,分别取正常大鼠和CIA大鼠的关节滑膜,用组织块培养法培养出原代FLS,培养至第3代进行干预实验.分别过表达、沉默miRNA-146a,并加入通路阻断剂和含药血清共培养,应用荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测miRNA-146a、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、白细胞介素-1受体相关激酶1(IRAK1)基因表达;Western Blot法检测磷酸化核因子κB p65(NF-κB p65,p-p65)、核因子κB抑制因子α(I κ B α)、增殖细胞核抗原(PCNA)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)蛋白表达;流式细胞术检测各组FLS凋亡;CCK-8法检测各组FLS增殖.结果 与正常组比较,模型组大鼠足掌厚度明显增加(P＜0.01);正常转染miRNA-146a组miRNA-146a、TRAF6、IRAK1基因表达及PCNA、p-p65蛋白表达增加,Caspase-3、Iκ Bα蛋白表达及FLS凋亡率降低(P＜0.05);正常转染反义miRNA-146a组miRNA-146a、TRAF6、IRAK1基因表达及PCNA、p-p65蛋白表达降低,Caspase-3、I κ Bα蛋白表达及FLS凋亡率增加(P＜0.05).与CIA对照组比较,CIA转染miRNA-146a组TRAF6、IRAK1基因表达及PCNA、p-p65蛋白表达增加,Caspase-3、IκBα蛋白表达及FLS凋亡率降低(P＜0.05);CIA转染反义 miRNA-146a 组 TRAF6、IRAK1 基因表达及 PCNA、p-p65 蛋白表达降低,Caspase-3、IκBα 蛋白表达及FLS凋亡率增加(P＜0.05).加入NF-κB通路阻断剂后,随着阻断时间延长及PCNA、p-p65蛋白表达降低,Caspase-3、IκBα蛋白表达增加(P＜0.05).与对照血清组比较,中药含药血清组细胞增殖率降低(P＜0.05).结论 温化蠲痹方可以通过miRNA-146a/NF-κ B环路诱导FLS凋亡、抑制FLS增殖.
温化蠲痹方、胶原诱导性关节炎、微小核糖核酸-146a、核因子κB信号通路、凋亡
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R285.5;R73;R593.22
浙江省自然科学基金资助项目;浙江省自然科学基金资助项目;浙江省中医药科技计划项目;杭州市卫生科技计划重大项目
2022-06-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
597-603
