基于HDAC6介导的自噬-溶酶体途径探究温肾通督方对微血管内皮细胞吞噬髓鞘碎片的影响
目的 基于组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)6介导的自噬-溶酶体途径,探究温肾通督方影响微血管内皮细胞(MECs)吞噬髓鞘碎片的作用机制.方法 通过CCK-8法检测温肾通督方冻干粉干预后MECs的增殖状态,筛选其最佳干预浓度;构建体外类血管结构,并建立髓鞘碎片与类血管结构共培养模型;将实验分为空白组(MECs)、模型组(MECs与髓鞘碎片共培养)、Tubastatin-A组(MECs与髓鞘碎片共培养+HDAC6抑制剂Tubastatin-A)以及温肾通督方组(MECs与髓鞘碎片共培养+温肾通督方冻干粉),通过免疫荧光染色法检测MECs吞噬髓鞘碎片的情况,并利用激光共聚焦进行拍照分析;通过Western Blot法检测MECs微管稳定系统(HDAC6、Kinesin5、Dynein)及自噬-溶酶体途径(LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ、p62、Beclin1)相关蛋白的表达.结果 免疫荧光结果表明,与模型组比较,Tubastatin-A组和温肾通督方组都可显著促进MECs吞噬髓鞘碎片(P＜0.05).Western Blot结果表明,与空白组比较,模型组HDAC6的蛋白表达显著增高(P＜0.05);与模型组比较,Tubastatin-A组和温肾通督方组HDAC6的蛋白表达显著降低,而Kinesin5、Dynein、Beclin1、p-ULK1/ULK1的蛋白表达显著增高(P＜0.05);与Tubastatin-A组比较,温肾通督方组 HDAC6、Kinesin5、Dynein、LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ、Beclin1、p-ULK1/ULK1的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 MECs吞噬髓鞘碎片会导致HDAC6的表达上调,但并不会影响MECs微管稳定系统及自噬-溶酶体途径;Tubastatin-A及温肾通督方均可通过抑制HDAC6的表达增强MECs微管系统的稳定,进而激活自噬-溶酶体途径,促进MECs吞噬髓鞘碎片.
脊髓损伤、温肾通督方、微血管内皮细胞、组蛋白脱乙酰基酶、自噬-溶酶体、髓鞘碎片
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R737.9;R318;R971
国家自然科学基金;国家自然科学基金;南京中医药大学自然科学基金青年项目;江苏高校优势学科中西医结合建设工程资助项目;江苏省研究生科研与实践创新计划项目
2022-06-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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589-596
