温肾阳方及其拆方通过TGF-β信号通路促进小鼠肢芽干细胞增殖与分化
目的 探讨温肾阳方及方中单味中药骨碎补、淫羊藿是否通过TGF-β信号通路促进小鼠肢芽干细胞增殖与分化.方法 分别采用温肾阳方(0.42 g生药/mL)、骨碎补(0.09 g生药/mL)及淫羊藿(0.09g生药/mL)煎剂和等体积生理盐水给大鼠灌胃,制备含药血清,分离孕12.5天小鼠肢芽干细胞进行微团培养,含药血清干预后,CCK-8法检测肢芽干细胞增殖能力,阿尔新蓝染色检测软骨分化能力,IPP软件统计软骨球个数及面积,Real-time PCR法检测Col2a1及Aggrecan表达水平.采用293T细胞,脂质体转染TGF-β信号通路报告基因4xSBE,荧光素酶实验分析各组对TGF-β信号通路的调节作用.采用TGF-β信号通路抑制剂SB431542抑制肢芽干细胞中TGF-β信号通路,进行阿尔新蓝染色及软骨细胞外基质检测.结果 与空白组比较,温肾阳方、淫羊藿、骨碎补组干预48 h和72 h后小鼠肢芽干细胞增殖均增强(P＜0.01,P＜0.05).阿尔新蓝染色显示,温肾阳方、淫羊藿、骨碎补组软骨球个数及面积增加(P＜0.05),软骨细胞基质Col2a1及Aggrecan的表达增强(P＜0.01).荧光素酶实验发现,与空白组比较,各中药组TGF-β信号通路活性上调(P＜0.01,P＜0.05).加入TGF-β信号通路抑制剂SB431542后,与空白组比较,抑制剂组软骨球个数及面积均明显减少(P＜0.01);而温肾阳方、淫羊藿、骨碎补组软骨生成抑制显著缓解(P＜0.05),但与空白组比较,软骨球个数及面积仍明显减少(P＜0.01,P＜0.05),Col2a1及Aggrecan水平也有相似的变化趋势(P＜0.01).结论 温肾阳方及温肾阳药骨碎补、淫羊藿可以部分通过TGF-β信号通路促进小鼠肢芽干细胞增殖与分化.
温肾阳;骨碎补;淫羊藿;软骨生成;转化生长因子-β
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国家重点研发计划项目;国家自然科学基金重点项目;国家自然科学基金项目;上海市青年科技英才扬帆计划;上海市"医苑新星"青年医学人才培养资助计划[No;沪卫计人事201972;上海市中医药三年行动计划2018-2020项目[No.ZY2018-2020-CCCX-3003]
2021-10-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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