淫羊藿苷抑制Aβ25-35诱导的N2a细胞自噬及减少细胞内外Aβ的实验研究
目的 研究淫羊藿苷(ICA)对β-淀粉样蛋白肽25-35(Aβ25-35)诱导的小鼠神经瘤母细胞(N2a)Aβ含量和自噬溶酶体途径的影响.方法 N2a细胞培养基加入不同浓度的ICA(0.05、0.1、0.2 μmol/L)孵育6 h,再将20 μmol/L老化的Aβ25-35处理24 h.实验分为5组:对照组(DMSO)、AD细胞模型组(Aβ25-35)、0.05 μmol/L ICA 干预组(Aβ25-35+ICA0.05)、0.1 μmol/L ICA 干预组(Aβ25-35+ICA0.1)、0.2 μmol/LICA 干预组(Aβ25-35+ICA0.2).将0.2 μmol/L 的 ICA 预处理 N2a 细胞2、4、6 h,再加入Aβ25-35处理24 h.收集细胞和培养基,ELISA法测定细胞内外Aβ40及Aβ42含量;免疫印迹法检测LC3、P62、p70S6K及其苏氨酸389位点磷酸化(p-p70S6K,活性形式)的表达;采用细胞免疫荧光技术观察LC3和4G8(识别Aβ17-24片段)的染色强度及LAMP2和4G8共定位情况.结果 与对照组比较,AD细胞模型组细胞存活率降低(P＜0.05),细胞内外Aβ42及Aβ40的含量增加(户＜0.01,P＜0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和P62蛋白表达均增加(P＜0.05),p-p70S6K表达增加(P＜0.01).与AD细胞模型组比较,0.05、0.1和0.2 μmol/L ICA干预组细胞活力下降(户＜0.05),0.2μmol/L ICA干预组细胞内外Aβ42及Aβ40含量降低(户＜0.05),0.1和0.2μmol/L 干预组 ICALC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ 和4G8蛋白表达降低(P＜0.05).0.2 μmol/L ICA预处理4、6 h可明显降低AD细胞模型细胞内外Aβ42和Aβ40的含量,降低LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ和P62蛋白表达及p-p70S6K/p70S6K(户＜0.05).结论 ICA可抑制Aβ25-35诱导的N2a细胞自噬,降低p70S6K活性并减少细胞内外Aβ.
淫羊藿苷;小鼠神经瘤母细胞;β样淀粉蛋白肽;自噬
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国家自然科学基金资助项目;湖北省自然科学基金项目
2021-10-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
1080-1086
