平肝潜阳方含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖、迁移及DNA甲基化水平的影响
目的 观察平肝潜阳方对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖和迁移的抑制作用及DNA甲基化水平的影响.方法 采用组织贴块法培养VSMCs,制备平肝潜阳方含药血清.将培养细胞分为正常组(原代培育的VSMCs)、模型组、叶酸组及平肝潜阳方组(下称中药组).以AngⅡ作为诱导复制VSMCs增殖及迁移模型,在AngⅡ诱导VSMCs培育24 h后,叶酸组加入40μg/m L叶酸干预48 h,中药组加入5％中药血清干预48 h.采用CCK-8(Cell Counting Kit)试剂盒绘制VSMCs生长曲线,MTT法测定VSMCs增殖活性,体外细胞划痕实验检测细胞迁移情况,以抗5-甲基胞嘧啶(5-mC)抗体进行免疫荧光检测细胞核中胞嘧啶甲基化水平;Real-time q-PCR方法检测DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)mRNA表达水平.结果 AngⅡ在10-6 mol/L浓度下诱导24 h后可促进VSMCs生长.与正常组比较,模型组细胞增殖活性及迁移数量明显增加,DNA甲基化水平明显降低(P ＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,叶酸组及中药组VSMCs生长、细胞增殖活性及迁移数量均明显降低,DNA甲基化水平升高(P＜ 0.05,P＜0.01);与正常组比较,模型组VSMCs DNMT1 mRNA表达水平降低(P＜0.01);与模型组比较,叶酸组及中药组VSMCs DNMT1 mRNA表达明显增强(P＜0.01).结论 平肝潜阳方可抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖和迁移,可导致基因组DNA高甲基化,其DNA甲基化水平改变可能与DNMT1表达有关.
血管平滑肌细胞、增殖与迁移、DNA甲基化、平肝潜阳方、DNA甲基转移酶1
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R543.5;R285.5;R734.2
国家自然科学基金;中南大学贵重仪器设备开放共享基金;湖南省中医药科研项目
2016-06-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
580-585
