花椰菜BobACT基因的克隆及其作为内参基因的研究

摘要：

实时荧光定量PCR技术是探索植物基因功能和调节机理的有效手段.选择合适的内参基因是获得实时荧光定量PCR准确性数据的必备条件.ACT基因高度保守且表达稳定,常作为内参基因被广泛应用.为了获得花椰菜ACT基因,以转录组测序和RT-PCR方法为手段克隆得到花椰菜肌动蛋白基因Actin.该基因等电点为5.395,理论分子量为41.77 kD;其cDNA开放阅读框长1134 bp,编码氨基酸377个,GenBank登录号为MG598643.Wolf Psort分析发现,BobActin蛋白亚细胞定位于细胞质基质中.Motif Scan分析显示,BobActin蛋白质的氨基酸序列4～377位为Actin保守结构域.进化分析表明,同源序列基因编码的蛋白质与同为十字花科的甘蓝、芜菁和油菜同源蛋白的相似性达到90％以上,具有高度的保守性.在此基础上,设计了l对荧光定量PCR引物,分析显示,该引物具有较高的特异性和扩增效率,在花椰菜根、茎、花、花球、叶片等不同组织和低温、高温、盐处理、干旱处理、ABA处理等胁迫处理下均能稳定表达,适合在花椰菜基因表达研究中作为内参基因,为开展花椰菜重要功能基因的挖掘、表达模式以及调控机理的研究提供参考.花椰菜在内参基因方面的研究还处于初步阶段,今后可继续克隆其他内参基因,丰富花椰菜的内参基因库,从而进一步提高花椰菜基因表达分析研究的稳定性、重复性和准确性.

关键词：花椰菜、actin、基因克隆、表达分析、内参基因

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资助基金：福建省属公益类科研院所基本科研专项2018R1026-10;国家大宗蔬菜产业体系CARS-23-G-53

在线出版日期：2019-06-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：781-789