芍药PlGA20ox基因的克隆及其在芽内休眠解除进程中的表达分析
以芍药”大富贵”芽为试材,采用RT-PCR结合cDNA末端快速扩增(RACE)技术,克隆得到GA20ox基因的cDNA全长,命名为PlGA20ox(GenBank登录号为KU886552).该基因全长1351 bp,开放阅读框1146 bp,共编码381个氨基酸,含有高度保守的20G-Fe(II)-Oxy蛋白结构域、Fe2+结合位点(His-247、Asp-249和His-303)和2-酮戊二酸结合位点(Arg-313和Ser-315).PlGA20ox蛋白分子量为43209.1 Da,为稳定蛋白,无跨膜结构域,无信号肽,属于C19-GAoxs.氨基酸序列同源性及系统进化树分析表明:PlGA20ox与牡丹PsGA20ox同源性高达96%,亲缘关系最近.采用农杆菌介导法将PlGA20ox基因于本生烟叶片中瞬时表达,观察显示:PlGA20ox蛋白定位于细胞质中.该基因在芍药各器官中均有表达,其中,在芽中表达最高,其次花瓣,在根、萼片、叶片和茎中表达微弱.实时荧光定量PCR和高效液相色谱(HPLC)结果显示:在低温解除芍药芽内休眠进程中,PlGA20ox表达水平呈先上升后总体下降趋势,且与内源GA3含量呈显著正相关(r=0.901*);外施赤霉素会明显增加内源GA3含量,但同时抑制PlGA20ox的表达,说明PlGA20ox调控GA3的合成,同时受植物体内活性GA3含量的负反馈调节.
芍药、PlGA20ox、克隆、亚细胞定位、表达、芽
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S56;S68
山东省自然科学基金ZR2014CM028. This work was supported by the Natural Science Foundation of Shandong Province Grant ZR2014CM028
2017-05-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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