巴西橡胶树胶乳均一化酵母双杂交cDNA文库构建

摘要：

以巴西橡胶树无性系‘热研7-33-97’胶乳为材料,采用SMART? cDNA合成技术反转录合成cDNA第一链,并通过LD-PCR合成双链cDNA (ds-cDNA),采用双链特异性核酸酶(DSN)对ds-cDNA进行均一化处理,并经过CHROMA SPIN+TE-400柱子去除短片段的cDNA,纯化后的cDNA和线性化载体pGADT7-Rec共转化酵母Y187感受态细胞构建均一化酵母双杂交cDNA文库。结果显示：均一化之前橡胶树胶乳cDNA片段分布较广,丰度分布不均匀,经DSN均一化处理和CHROMA SPIN+TE-400柱纯化后,小于500 bp的片段得到有效去除,高丰度cDNA明显下降,而且RT-PCR扩增结果显示,均一化处理后,18S rRNA和β-actin两个管家基因的表达丰度均明显降低。最终获得初始文库的独立克隆为1.26×106 cfu,文库滴度达到3.23×107 cfu·mL-1,重组率为87%,平均插入片段大于1.0 kb。本研究构建了一个橡胶树胶乳均一化酵母双杂交cDNA文库,为进一步研究天然橡胶生物合成途径及其调控的分子机制提供借鉴。

关键词：巴西橡胶树、胶乳、酵母双杂交cDNA文库、均一化

所属期刊栏目：52

分类号：Q7;S663.1;S511.01

资助基金：国家自然科学基金31300503;31460197

在线出版日期：2016-05-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：312-316