大豆氨基酸透性酶基因GmAAP2-like 1的克隆及功能初探

摘要：

氨基酸透性酶(amino acid permeases)在植物不同器官的氨基酸转运过程中发挥着重要作用，但迄今为止，大豆中氨基酸透性酶相关的研究甚少。本文利用大豆初生叶水培系统对大豆(Glycine max)品种‘Williams 82’进行缺氮处理后，发现与足氮对照相比，大豆初生叶中GmAAP2-like 1基因的表达明显上调。对大豆不同器官中GmAAP2-like 1的转录水平进行RT-PCR检测，结果显示该基因在花、叶和茎中的表达量较高而在根和种子中表达量很低。构建GmAAP2-like 1(无内含子)过表达植物表达载体，在转化农杆菌时发现，该载体转化农杆菌GV3101致死；改进载体构建策略，采用融合PCR方法，在GmAAP2-like 1的第一个外显子后插入一段内含子序列，改进的载体可以成功转化农杆菌。应用农杆菌介导的花苞浸泡法转化拟南芥，对所获得的转基因拟南芥抗性苗进行基因组PCR和RT-PCR鉴定，共检测到8个GmAAP2-like 1不同程度表达的转基因拟南芥株系，且其中的内含子都得到了正确的剪切。氨基酸有毒类似物(MSX)处理实验表明：转基因拟南芥对MSX处理比野生型更为敏感，暗示GmAAP2-like 1具有运输谷氨酸等酸性氨基酸的功能。

关键词：大豆、氨基酸透性酶、缺氮、融合PCR、氨基酸运输

所属期刊栏目：52

分类号：R33;TS2

资助基金：教育部科学技术研究重大项目313032;国家自然科学基金31370285;国家转基因生物新品种培育科技重大专项2014ZX08009-030B-002。This work was supported by the Key Grant Project of the Chinese Ministry of EducationGrant 313032;the National Natural Science Foun-dation of ChinaGrant 31370285;the Major Technological Program on Cultivation of New Varieties of Genetically Modiifed OrganismsGrant 2014ZX08009-030B-002

在线出版日期：2016-04-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：19-25