基于AO/PI荧光染色原理的杀伤细胞数量及活率检测方法学验证和细胞培养、冻存、复苏稳定性研究

摘要：

目的 验证基于吖啶橙(AO)/碘化丙啶(PI)荧光染色原理的自动细胞分析仪检测细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)数量及活率的可行性,并对CIK细胞培养全过程及冻存复苏后至使用前过程进行检测,建立相应的数量及活率标准.方法 采集健康供者的外周血分离、培养CIK细胞,取培养过程中的细胞使用AO/PI荧光染色法、应用自动细胞分析仪检测细胞数量及活率,对结果的专属性、准确度、精密度、数量线性及范围、活率线性及范围进行验证.应用建立的方法对外周血分离后的外周血单个核细胞(PBMC)、培养过程中、冻存前及复苏后的CIK细胞数量及活率进行全过程检测.结果 专属性、准确度、精密度、数量线性及范围、活率线性及范围验证均符合预期要求.CIK细胞培养全过程活率均不低于80％,样本平均倍增时间为(42.26±1.17)h.冻存前的CIK细胞在加入含5％DMSO的冷冻保护剂后90min内活率稳定,复苏后未经稀释或洗涤处理120min内活率稳定,复苏后经洗涤去除DMSO处理后12 h内活率稳定.结论 基于AO/PI荧光染色原理的自动细胞分析仪可以用于检测CIK细胞的数量及活率,其结果可以用于细胞放行评价及稳定性研究.

关键词：细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)、AO/PI荧光、自动细胞分析仪、细胞数量、活率、验证、稳定性

所属期刊栏目：46

分类号：R965.2(药理学)

资助基金：科诺医学细胞质量检测技术公共服务平台S-2020-M74-500513

在线出版日期：2023-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：377-383