基于UDP-葡萄糖醛酸转移酶1A1抑制探讨二蒽酮的潜在肝毒性

摘要：

目的 基于胆红素代谢酶UDP-葡萄糖醛酸转移酶1A1(UGT1A1)靶点评价何首乌中二蒽酮类成分的潜在肝毒性.方法 采用Discovery Studio 2.5软件的From Receptor Cavities模块对UGT1A1酶蛋白空腔进行自动识别,将反式-大黄素-大黄素二蒽酮(trans-EMD)、顺式-大黄素-大黄素二蒽酮(cis-EMD)与UGT1A1酶蛋白进行对接,确定待测单体与酶蛋白的作用方式以及连接的紧密程度;应用大鼠肝微粒体孵育体系,加入底物胆红素对照品溶液,评价trans-EMb、cis-EMD(0.037、0.110、0.330、0.990、2.970 μg·mL-1)对UGT1A1酶的作用,同时启动Ⅰ、Ⅱ相代谢,以表观抑制常数(Ki)为评价指标:CCK-8法检测trans-EMD、cis-EMD(0.04、0.10/0.30、1.00/3.00 μg?mL-1)作用24 h对HepaRG细胞的毒性作用;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验检测trans-EMD、cis-EMD(0.04、0.30、3.00μg·mL-1)作用24h对HepaRG细胞UGTIA1 mRNA水平的影响.结果 分子对接实验显示trans-EMD、cis-EMD可与UGT1A1结合于site F,2个化合物10或10'位不同氢键构型可引起化合物空间构型的改变,影响其与UGT1A1的结合强弱;体外酶抑制实验表明trans-EMD、cis-EMD对UGT1A1酶均表现出竞争型抑制作用,抑制作用较强;细胞毒性实验表明trans-EMD(IC50为1.333μg·mL-1)和cis-EMD(IC50为1.715 μg·mL-1)均表现出较明显的HepaRG细胞毒性,IC50值较小;与对照组比较,trans-EMD和cis-EMD 0.30、3.00 μg·mL-1 均可显著下调UGT1A1 mRNA表达水平(P＜0.05),且作用存在浓度相关性.结论 具有大黄素(10→10')大黄素或大黄素(10→10')大黄素母核结构的二蒽酮化合物是一类具有潜在肝毒性的化合物,其毒性作用可能与抑制胆红素代谢酶UGT1A1相关.

关键词：分子对接、胆红素代谢酶、UDP-葡萄糖醛酸转移酶1A1(UGT1A1)、何首乌、二蒽酮、肝毒性

所属期刊栏目：45

分类号：R991(毒物学（毒理学）)

资助基金：国家自然科学基金81973476

在线出版日期：2022-11-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1779-1785