含活血通络方血清对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞增殖作用的研究

摘要：

目的 探究含活血通络方血清调控IncRNA MEG3 对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞(human retinal microvascular endothelial cells,hRMECs)增殖及凋亡的影响作用.方法 选取 20 只SD大鼠,采用随机数字表法对 10 只大鼠灌胃活血通络方,10 只灌胃等量生理盐水.灌胃结束 1h后制备相应血清.分别采用 5mmol/L葡萄糖或 30mmol/L的D-甘露醇、葡萄糖溶液对hRMECs细胞进行诱导 24h.按照诱导情况将细胞分为正常对照组(5mmol/L葡萄糖,n=6)、等渗组(30mmol/L D-甘露醇,n=6)、高糖组(30mmol/L 葡萄糖,n=6)、高糖+2.5%含药血清组(n=6)、高糖+7.5%含药血清组(n=6)、高糖+10%含药血清组(n=6),相应血清干预 24h.采用CCK-8 法、酶联免疫吸附法检测细胞增殖情况及丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)含量;采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time fluorescence polymerase chain reaction,qRT-PCR)测定细胞IncRNA-MEG3 mRNA表达,采用流式细胞术测定细胞凋亡情况;采用蛋白免疫印迹法检测 NOX4、VAV2、血管表皮生长因子受体(vascular epidermal growth factor receptor,VEGFR)、磷脂酰肌醇 3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)、p-PI3K、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)、p-AKT、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、p-mTOR蛋白表达情况.结果 与正常对照组比较,高糖组细胞增殖率下降,MDA 含量增加,GSH-Px 含量降低,凋亡增加,IncRNA-MEG3 mRNA表达降低,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR、NOX4、VAV2、VEGFR蛋白表达均升高,差异均有统计学意义(P<0.05).与高糖组比较,高糖+7.5%含药血清组和高糖+10%含药血清组细胞增殖率增加,MDA含量降低,GSH-Px含量升高,IncRNA-MEG3 表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05);高糖+2.5%含药血清组、高糖+7.5%含药血清组、高糖+10%含药血清组的细胞凋亡下降,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR、NOX4、VAV2、VEGFR蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 含活血通络方血清可介导IncRNA-MEG3 调控相关蛋白表达来减少高糖诱导hRMECs细胞的凋亡.

关键词：糖尿病视网膜病变、活血通络方、IncRNA-MEG3、凋亡

所属期刊栏目：61

分类号：R285.5(中药学)

资助基金：浙江省自然科学基金项目LGF21H120001

在线出版日期：2023-07-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：75-80