优化RT-PCR检测试剂在流感病毒检测中的应用评价

摘要：

目的 探讨优化的逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测试剂在流感病毒检测中的应用.方法 选取乙型流感病毒Yamagata系细胞毒株1株对其倍比稀释,取高、中、低三个稀释浓度提取流感病毒核酸作为模板,采用具有高扩增效率的SpeedStar HS DNA聚合酶和HiScriptⅡReverse Transcriptase逆转录酶进行PCR反应体系优化,并用优化试剂对三个浓度的流感病毒模板进行批间和批内重复性试验,与常规试剂TaKara One Step PrimeScriptRT-PCR Kit反应试剂盒进行对比研究.结果 优化试剂的PCR反应体系整个扩增反应时间从96 min缩短至55 min;通过Ct值比较,中、低浓度条件下的扩增效率与常规TAKARA试剂比较差异有统计学意义(P＜0.05);组间比较,差异有统计学意义(P＜0.05);该试剂的组内试验和组间试验的变异系数均小于2％,显示其具有良好的可重复性.优化试剂比TAKARA公司One Step PrimeScript RT-PCR Kit成品试剂盒节约1/4的成本,有一定的经济效益.结论 优化的RT-PCR反应试剂,缩短了PCR反应时间,具有良好的稳定性和重复性,同时节约了试剂检测成本,有一定的经济效益和社会推广价值.

关键词：乙型流感病毒、逆转录聚合酶链反应、核酸、优化

所属期刊栏目：55

分类号：R446.5(诊断学)

资助基金：浙江省嘉兴市科技计划项目2014AY21036-3

在线出版日期：2017-08-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：99-102