小鼠cyclin A2正义和反义真核表达载体的构建及鉴定

摘要：

目的 构建小鼠cyclin A2的正义和反义真核表达载体.方法 采用小鼠胚胎组织取材,提取总RNA.设计引物,采用RT-PCR方法扩增小鼠cyclin A2 mRNA得到cyclin A2的DNA,将此DNA插入pGEM-T载体,转化入JM109感受态细菌.将鉴定得到的重组质粒进行扩增,EcoR Ⅰ酶切后,回收cyclin A2目的片段亚克隆入pcDNA3.1真核表达载体.酶切筛选鉴定重组的真核表达载体pcDNA3.1-cyclin A2.结果 将小鼠基因的开放阅读框(ORF)重组到真核表达载体pcDNA3.1内,用EcoR Ⅰ酶切重组质粒后可得到一接近1660 bp的DNA条带,核酸测序证实和GenBank 所公布序列相符.HindⅢ酶切鉴定重组质粒后,证明分别为正向和反向插入载体的质粒.DNA测序证明构建的真核表达载体pcDNA3.1-cyclin A2的序列是正确的.结论成功构建了小鼠cyclin A2的正义和反义真核表达载体.

关键词：细胞周期蛋白A2、正义、反义、真核表达载体

所属期刊栏目：50

分类号：R346(人体生物化学、分子生物学)

在线出版日期：2013-06-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1-3,7