核心结合因子α1过表达慢病毒载体的构建及鉴定

摘要：

目的 构建含人CBF α 1/RUNX2基因的过表达慢病毒载体.方法 采用PCR技术体外扩增人CBF α 1/RUNX2,将扩增产物与慢病毒载体pGC-FU连接,构建重组质粒pGC-FU-hCBFα1/RUNX2,并进行酶切及测序鉴定.鉴定正确的克隆转染293T细胞,经荧光显微镜观察和Western Blot检测hCBFα 1/RUNX2基因在293T细胞内的瞬时表达.再利用脂质体转染法将pGC-FU-hCBFα1/RUNX2、pHelper1.0和pHelper2.0三质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒,并通过实时荧光定量PCR检测病毒滴度.结果 重组质粒经测序证实,插入片段与人CBFα 1/RUNX2基因序列完全一致.荧光显微镜观察以及Western Blot印迹均证实pGC-FU-hCBFα1/RUNX2中携有正确的hCBFα1/RUNX2基因,并能在293T细胞中瞬时表达.包装慢病毒后实时荧光定量PCR检测病毒滴度为(2.00×108)TU/mL.结论 成功构建了携带hCBFα1/RUNX2基因的重组慢病毒载体,为进一步研究其在牙周组织再生中的生物学功能奠定了基础.

关键词：CBFα1/RUNX2、慢病毒载体、转染

所属期刊栏目：48

分类号：R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：浙江省温州市科技局资助项目Y20070052;浙江省教育厅资助项目20070914

在线出版日期：2011-06-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：7-9,21,封3