定点突变重组ING4腺病毒基因转染系统的载体构建及鉴定

摘要：

目的 重组构建hING4(人ING4)氨基酸序列.方法 运用定点突变技术,在鼠ING4的基础上,设计两对突变引物P1、P2和P3、P4及全长ING4上下游引物P5、P6,通过四轮PCR,将mlNG4基因序列进行人源化改造,获得了编码hING4氨基酸的基因序列.将获得酶切目的 基因片段,连接到转移载体pAdTrack-CMV上,形成重组转移载体pAdTrack -CMV-ING4.重组转移载体经Pmel酶切后与pAdEasy-1腺病毒载体在BJ5183大肠杆菌中同源重组,得到重组腺病毒载体pAdeasy-1-pAdTraek-CMV-ING4,经Pacl酶切后脂质体转染QBI-293A包装细胞,获得重组腺病毒Ad-ING4.结果 测序和RT-PCR结果表明hING4基因构建成功.结论 hING4基因重组腺病毒载体构建成功.

关键词：ING4基因、点突变、腺病毒、载体、基因治疗

所属期刊栏目：47

分类号：R34(人体生物化学、分子生物学)

在线出版日期：2010-03-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：18-20