真菌病毒FpgMBV1中P3基因的原核表达及多克隆抗体的制备

摘要：

采用RT-PCR法从假禾谷镰孢菌(Fusarium pseudograminearum)弱毒菌株FC136-2A的菌丝中扩增出假禾谷镰孢菌巨型双链RNA病毒1(Fusarium pseudograminearum megabirnavirus 1,FpgMBV1)的P3蛋白编码序列.测序结果显示,FpgMBV1-P3蛋白的编码序列长2 700 bp,编码901个氨基酸残基.构建原核表达载体pET28a-FpgMBV1-P3并转化大肠杆菌BL21 (DE3)菌株,在25℃以0.5 mmol·L-1 IPTG诱导表达重组蛋白.SDS-PAGE分析表明,重组蛋白分子量约为90 kDa,与预期分子量大小相符.将该重组蛋白作为抗原免疫日本大耳白兔,获得抗血清,采用间接ELISA测定其效价达1∶128 000,能够特异性检测到假禾谷镰孢菌菌丝中的FpgMBV1-P3蛋白.研究结果可为探究FpgMBV1-P3的结构和功能,以及进一步探讨FpgMBV1在假禾谷镰孢菌弱毒菌株FC136-2A中的作用机制奠定基础.

关键词：假禾谷镰孢菌巨型双链RNA病毒1、P3蛋白、原核表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：50

分类号：S432.41;S432.44(病虫害及其防治)

资助基金：国家公益性行业农业科研专项;河南省科技攻关计划农业领域项目;2018年度河南省高等学校青年骨干教师培养计划

在线出版日期：2020-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：567-573