番茄褪绿病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法

摘要：

根据番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)热激蛋白70(Hsp70)的基因序列,设计ToCV实时荧光定量PCR特异引物.利用重组质粒ToCV-1为标准品建立SYBR Green Ⅰ实时荧光定量方法.针对引物浓度、退火温度、特异性、灵敏度、重复性和稳定性进行系列优化.结果表明,最适退火温度为63℃,最适引物浓度为0.3 μmol· L-1.熔解曲线为特异性单峰,表明其特异性良好.建立的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR较常规PCR灵敏100倍,且具有良好的重复性和稳定性.基于SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR技术建立的ToCV检测方法,速度快、特异性强、灵敏度高、重复性好,可以用于ToCV的定量检测.

关键词：番茄褪绿病毒、SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR、病毒检测

所属期刊栏目：48

分类号：S432.41(病虫害及其防治)

资助基金：创新工程项目;山东省自然科学基金;潍坊市科学技术发展计划

在线出版日期：2018-11-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：700-706