甘蔗花叶病毒第Ⅳ组分离物RT-PCR检测体系的建立及应用

摘要：

甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)是引起我国玉米矮化叶病的主要病毒.根据其基因组序列,SCMV可以分为4个组,其中第Ⅳ组分离物属于新出现的强毒株系.为了快速检测SCMV尤其是Ⅳ组分离物的发生情况,我们针对SCMV Ⅰ-Ⅳ组及Ⅳ组分离物设计了6对引物,从中筛选出特异性最强的2对引物(Ⅰ-Ⅳ-2F/Ⅰ-Ⅳ-2R和Ⅳ-1F/Ⅳ-1R),进行PCR体系的优化.优化后的PCR体系为:退火温度51℃,dNTP终浓度为0.1mM,引物终浓度为0.20 μM,TaqDNA聚合酶终浓度为0.015 U·μL-1.利用该体系,引物对Ⅰ-Ⅳ-2F/Ⅰ-Ⅳ-2R和Ⅳ-1F/Ⅳ-1R均能够从50 ng感病叶片或0.05 ng病毒RNA中检测出SCMV.通过优化两对引物浓度比例建立了能同时检测SCMV所有分离物及第四组分离物的双重PCR体系.利用该体系从山东、河南及云南均检测出SCMV第Ⅳ组分离物的发生.本研究为SCMV尤其是SCMV第Ⅳ组分离物的快速检测提供了技术支持.

关键词：甘蔗花叶病毒、第Ⅳ组、检测、反转录-聚合酶链式反应

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分类号：S432.41;Q939.95(病虫害及其防治)

资助基金：山东省现代农业产业技术体系;山东省农业重大应用创新项目

在线出版日期：2017-09-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：463-469