酵母双杂交BBTV DNA2 ORF诱饵质粒构建及其互作蛋白筛选

摘要：

香蕉束顶病毒DNA2组分编码蛋白的功能尚不清楚,为了揭示其编码蛋白的功能,以本实验室保存的BBTV Haikou4分离物总DNA为模板进行PCR扩增,利用Gateway重组技术将BBTV DNA2ORF构建到酵母双杂交系统(ProQuestTM Two-Hybrid System,Invitrogen)的诱饵载体pDEST-32中,并通过酵母表型验证、诱饵质粒毒性验证以及自激活验证.结果显示,转有pDEST32-DNA2ORF质粒的MaV203酵母菌具有弱的自激活背景,在3-AT浓度为25 mmol/L的SeC-Leu-Trp-His平板上生长较弱,但在3-AT浓度为50 mmol/L SeC-Leu-Trp-His平板上不生长,表明诱饵质粒背景自激活可被浓度为50 mmol/L的3-AT所抑制.在该条件下共转pDEST32-DNA2 ORF和文库质粒到MaV203感受态细胞进行互作蛋白筛选,通过PCR和测序等手段最终鉴定35个候选蛋白基因,分别编码转录调控因子、生长发育相关蛋白、代谢相关蛋白、抗逆相关蛋白和未知蛋白等.酵母双杂交BBTV DNA2ORF诱饵质粒的构建及其与寄主互作蛋白的筛选,为揭示DNA2组分的蛋白功能提供了科学线索.

关键词：DNA2 ORF、酵母双杂交、质粒构建、自激活验证

所属期刊栏目：45

分类号：S432.41(病虫害及其防治)

资助基金：国家自然科学基金资助项目31401709,31070131;海南省重大科技项目ZDZX2013023;中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资助ITBB110304

在线出版日期：2015-08-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：376-383