白粉菌侵染后的拟南芥酵母双杂交cDNA文库构建及其利用

摘要：

拟南芥广谱抗病基因RPW8对拟南芥白粉病菌、霜霉病菌和烟草花叶病毒等均具有抗性.为了深入研究其广谱抗病机制,筛选鉴定与RPW8具有直接相互作用的蛋白,我们以含有RPW8的拟南芥纯合转基因系S5为材料,接种拟南芥白粉菌系UCSC1,36 h后取样,构建了白粉菌侵染初期的拟南芥cDNA文库.为了提高文库对长片段基因5'端的覆盖率,分别使用含有oligo (dT)和oligo(dN)的接头引物反转录cDNA第一链,PCR扩增双链cDNA.将纯化后的双链cDNA与线性化载体pGADT7-Rec混合,利用同源重组技术在酵母菌株Y187中构建cDNA文库.经检测,文库转化效率为5.0× 106/3μgpGADT7-Rec,滴度为2.5×108 CFU·mL-1,插入片段长度在350～2 000bp之间,平均插入片段大小为750 bp.用RPW8.1和RPW8.2构建诱饵载体,分别获得11和12个候选互作蛋白.结果表明此cDNA文库质量较好,适用于互作蛋白的筛选.

关键词：RPW8、白粉菌、拟南芥、cDNA文库、酵母双杂交

所属期刊栏目：45

分类号：S432.4(病虫害及其防治)

资助基金：国家自然科学基金31071670

在线出版日期：2015-08-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：370-375