瓜类褪绿黄化病毒外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达及抗血清的制备

摘要：

根据已报道的瓜类褪绿黄化病毒(Cucurbit chlorotic yellows virus,CCYV)外壳蛋白(CP)基因的核苷酸序列设计引物,利用RT-PCR方法从感病甜瓜中扩增得到长度为753 bp的CP基因,将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-3上,获得重组载体pGexCP,在大肠杆菌BL21菌株中诱导表达,SDS-PAGE分析表明,经IPTG诱导,CP基因在大肠杆菌BL21中得到了高效表达.以表达的蛋白为抗原,免疫家兔,制备了CCYV外壳蛋白的特异性抗血清.ACP-ELISA检测结果表明,当CP蛋白浓度为2.5μg/mL时,血清效价高达5.12×105.Westem blot分析表明制备的抗体检测CCYV侵染的甜瓜叶片得到特异性的条带,表明该抗体的特异性较好.ACP-ELISA检测结果表明,制备的抗血清可用于田间甜瓜病样的检测.本试验为CCYV的快速检测提供了重要的研究材料.

关键词：瓜类褪绿黄化病毒、外壳蛋白基因、原核表达、抗血清

所属期刊栏目：43

分类号：S432.41(病虫害及其防治)

资助基金：现代农业产业技术体系建设专项资金CARS-26-13;NSFC-河南人才培养联合基金项目U1204319

在线出版日期：2013-11-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：495-499