不同探针大小、标记物及反应底物对马铃薯类病毒杂交检测的影响

摘要：

灵敏可靠地检测马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid,PSTVd)对脱毒种薯的生产具有重要意义.本研究探索了影响核酸杂交检测技术的关键因素.通过基因克隆技术构建了插有PSTVd全长单体、双体及片段的载体.分别以地高辛和同位素为标记物,利用PCR和转录标记技术制备cDNA和RNA探针.比较探针大小、标记物、标记方法、反应底物等对检测灵敏度的影响.结果显示,以地高辛为标记物,利用PCR标记制备的PSTVd双体cDNA探针,在以CDPStar为底物,通过在柯达X-OMAT BT胶片进行化学发光反应来分析结果的检测灵敏度最高,可以检测到0.05pg总RNA中的PSTVd,是国外报道检测灵敏度的500倍.利用核酸斑点杂交技术检测PSTVd具有灵敏度高,一次可检测样品数量多等特点,对于大规模PSTVd检测更加方便可行.

关键词：马铃薯纺锤块茎类病毒、探针、核酸斑点杂交、标记

所属期刊栏目：41

分类号：S435.313(病虫害及其防治)

资助基金：国家科技部基础研究重大项目2004ccc02900;黑龙江省攻关重大项目GA08B102;农业部马铃薯产业创新体系NYCYTX-15

在线出版日期：2011-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：154-160